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基质金属蛋白酶-2沉默对喉癌侵袭生长的影响
目的 探讨重组慢病毒介导的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)沉默对喉鳞癌侵袭生长的抑制作用.方法 该研究于2016年1—3月,采用RNA干扰技术,运用MMP-2基因siRNA的重组慢病毒(MMP-2-RNAi-Lentivirus)转导喉鳞癌Hep-2细胞,通过侵袭小室实验观察MMP-2-RNAi-Lentivirus转染后喉癌细胞侵袭能力的变化;构建喉鳞癌动物模型时,18只BALB/c Nude裸鼠肿瘤生长直径达到1.0 cm时随机分组,治疗组9只,空载体对照组9只,给予瘤内注射等量的GFP-Lentivirus,进一步观察其对喉癌侵袭转移的影响.结果 侵袭实验显示,实验组Hep-2细胞穿过人工基底膜的细胞数为(12±4)个,明显少于空载体对照组的(35±6)个,差异具有统计学意义(P<0.05);体内实验显示,MMP-2-RNAi-Lentivirus瘤内注射后,裸鼠移植瘤平均重量为(1.186±0.225)g,平均体积为(0.974±0.216)cm3,对照组分别为(2.127±0.344)g、(1.618±0.272)cm3,实验组低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 重组慢病毒介导的MMP-2基因沉默能有效的抑制喉癌细胞的增殖过程,可为喉癌基因治疗提供实验参考.
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慢病毒介导的RNA干扰技术构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型
目的:构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型,为进一步研究EMP-1在椎间盘退变中的作用机制提供理想的研究平台.方法:利用慢病毒载体介导的小发夹状RNA (small hairpin RNA,shRNA)转入人胚胎肾细胞(293FT)包装慢病毒,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,72h后收集病毒上清并感染人胚稚间盘髓核细胞,Western blot、RT-PCR鉴定基因干扰效果,凝胶成像分析软件对条带显色程度进行分析,得到EMP-1/GAPDH的平均值.结果:重组慢病毒滴度测定约为1×107 U/ml,感染靶细胞后得到EMP-1基因低表达细胞模型,EMP-1mRNA表达水平比正常细胞下降了50％.半定量RT-PCR结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.46±0.03降至0.32±0.01,Western blot结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.50±0.01降至0.25±0.01.结论:通过慢病毒包装技术,成功构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型.
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慢病毒介导SOX9基因转染骨髓间充质细胞中的基因表达
目的:构建携带小鼠SOX9基因的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质细胞中的表达.方法:从含有小鼠SOX9基因的质粒提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增目的基因.连接目的基因与经Age-Ⅰ酶切线性化的慢病毒载体,转化感受态的大肠杆菌对质粒进行扩增,筛出阳性转化子,经293T细胞包装,收集病毒后,通过基因测序和限制性核酸内切酶酶切的方法对质粒进行鉴定.Lenti-SOX9-EGFP体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率.同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠SOX9基因的表达.结果:成功构建了携带SOX9基因慢病毒载体,Lenti-SOX9-EGFP能高效转染小鼠骨髓间充质细胞.RT-PCR和Western Blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞表达目的基因产物.结论:利用慢病毒介导SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质细胞,而且SOX9基因在小鼠骨髓间充质细胞中得到表达,这为SOX9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础.
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敲减SOX9基因对骨髓间充质干细胞表达的影响
目的:构建小鼠S0X9基因干扰的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质干细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质干细胞中的表达影响.方法:针对小鼠SOX9基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的双链DNAoligo连入酶切后的RNA干扰载体上,构建Lenti-SOX9-siRNA-EGFP载体,鉴定扩增.利用SOX9基因沉默载体体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率.同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠SOX9基因的表达.结果:成功构建了Lenti-SOX9-siRNA-EGFP,SOX9基因沉默慢病毒载体,能高效转染小鼠骨髓间充质细胞.RT-PCR和Western Blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞基因表达沉默.结论:利用慢病毒结合RNA干扰技术敲减小鼠SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质干细胞,且SOX9基因在小鼠骨髓间充质干细胞中发生了沉默,这为SOX9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础.
关键词： Sox9 慢病毒属 转染 骨髓间充质干细胞细胞 -
HIV P66蛋白的表达、纯化及活性检测
此研究的目的是体外表达HIV-1逆转录酶P66亚单位蛋白,并得到纯度较高且具有活性的重组蛋白.首先通过PCR方法从含HIV-1 HXB2标准株全基因的质粒中扩增出全长p66基因,插入表达载体pTWIN1,构建pTWIN-p66质粒.再将该质粒转化到表达菌BL21,在IPTG诱导下表达P66蛋白.表达产物经几丁质柱一步纯化后得到P66蛋白纯品.纯化的P66蛋白分别催化B95-8细胞总RNA、RT试剂盒中对照RNA进行逆转录;同时以试剂盒中的M-MLV RT为对照进行相同的逆转录,PCR后电泳比较活性.结果显示我们构建的pTWIN-p66质粒在IPTG诱导下在原核细胞中P66亚单位蛋白表达量较高,经一步纯化后蛋白凝胶扫描纯度达88%,并具有较好的逆转录活性.与M-MLV RT体外活性比较,两者活性相当.该研究为进一步开发国产HIV确证诊断试剂及抗AIDS药物的研究打下了初步基础.
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慢病毒介导的Isl1基因在人骨髓间充质干细胞中的表达
研究慢病毒介导的Isl1基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)中的表达情况,并检测其下游基因Nkx2.5和Flk-1的表达。方法 多位点Gateway载体构建技术构建2K7puro/EF 1α-Isl1慢病毒表达载体(由EF1α启动子启动Isl1基因表达)。包装细胞293FT细胞获得慢病毒,再转染至hMSC。利用嘌呤霉素抗性筛选出Isll阳性细胞。应用RT-PCR、Western blotting检测hMSC中Isl1基因在转染后1～6周的mRNA和1～4周的蛋白表达情况。结果 成功构建了慢病毒载体EF1α-Isl1,转染后hMSC中检测出Isl1基因mRNA和蛋白的表达,其mRNA表达随着培养时间延长而上调,第3周表达量(0.65±0.14)较1、2周增多(0.36±0.09,0.37±0.05,均P＜0.05),3周后表达趋于稳定。转染后在无任何诱导剂的情况下,检测到Isl1下游基因Nkx2.5的表达,但尚未见Flk-1的表达。结论通过慢病毒载体将Isl1基因转染hMSC后,可获得长期稳定的表达,并在无任何诱导剂的情况下,能促进下游基因Nkx2.5的表达。
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携带甲胎蛋白基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及其对靶基因的沉默效率
目的 构建携带甲胎蛋白(AFP)基因小干扰RNA(siRNA)的慢病毒载体并转染肝癌细胞,评价其对AFP基因的沉默效率.方法 设计和构建针对AFP基因的阳性siRNA及不针对任何已知基因的阴性siRNA,将其分别插入携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒载体,然后转染到表达AFP基因的人肝癌细胞HepG2并筛选阳性表达细胞株,分别为慢病毒转染阳性siRNA组和慢病毒转染阴性siRNA组.同时设立脂质体转染阳性siRNA组、脂质体转染阴性siRNA组以及加AFP siRNA而未用转染试剂的siRNA组、空白对照组.荧光显微镜观察评估转染效率,荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组HepG2细胞APF mRNA及蛋白的相对表达量,比较不同转染方法对AFP基因表达的抑制率.结果 慢病毒能够有效地转染siRNA到HepG2细胞内.荧光定量PCR显示慢病毒转染siRNA对AFP mRNA表达的抑制率显著高于脂质体转染siRNA(92.1％比74.3％,P＜0.05).免疫印迹亦显示慢病毒转染siRNA对AFP蛋白表达的抑制率显著高于脂质体转染siRNA(88.2％比63.7％,P＜0.05).结论 慢病毒转染AFP siRNA能够更有效地抑制HepG2细胞内AFP基因表达.
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慢病毒靶向携带survivin-siRNA抗肺腺癌裸鼠体内研究
目的 探讨慢病毒载体介导survivin-siRNA对人肺腺癌裸鼠移植瘤的体内抑瘤活性.方法 参考siRNA的设计策略,构建表达survivin-siRNA 的慢病毒载体;于各BALB/C裸鼠右侧腋窝皮下接种人肺腺癌A549细胞悬液,构建人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,肿瘤组织局部注射survivin-siRNA的慢病毒载体,观察肿瘤的体积及随时间变化的生长曲线: 通过碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化.结果 慢病毒载体介导survivin-siRNA对裸鼠人肺腺癌A549的抑瘤率为46.07%:经过PI和Annexin-V染色区分凋亡早晚期的细胞为30%～35%,荧光显微镜下观察肿瘤细胞凋亡;G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例则明显减少.结论 慢病毒载体介导的siRNA能有效抑制裸鼠移植人肺腺癌A549的survivin基因的表达,有效激发细胞凋亡.
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慢病毒介导的人Bax基因和人肝细胞生长因子基因在小鼠胚胎成纤维细胞中的共表达
目的 构建绿色荧光蛋白标记的人Bax基因(hBax)和人肝细胞生长因子基因(hHGF)双基因共表达的重组慢病毒.证实已包装成功的慢病毒能感染正常细胞并表达目的 蛋白.方法 通过重叠PCR技术构建attB1-K-hBAX/T2A/eGFP/P2A/hHGF-attB2基因片段,利用gateway technology构建慢病毒载体质粒pLV.EX2d.null-EF1A>hBAX/T2A/eGFP/P2A/hHGF和阴性对照质粒pLV.EX2d.null-EF1A>eGFP并测序,上述两种质粒分别与辅助质粒共转染293FT细胞包装病毒,荧光显微镜检测病毒滴度.实验分为实验组(感染了共表达Bax和HGF的慢病毒)、阴性对照组(仅感染了表达绿色荧光的慢病毒)和空白组(未作任何处理的正常NIH3T3细胞)三组,RT-PCR和Western blot检测染毒后各组细胞Bax和HGF的表达.结果经鉴定慢病毒载体质粒构建正确,荧光显微镜检测hBax和hHGF共表达慢病毒滴度为7.8×107 TU/ml,仅表达绿色荧光蛋白的阴性病毒滴度为9×107 TU/ml.将包装成功的慢病毒感染NIH3T3细胞48 h后,RT-PCR和Western blot结果显示实验组与其他两组相比,Bax和HGF的表达明显上调(P<0.05).结论 标记增强型绿色荧光蛋白的表达hBax和hHGF双基因慢病毒构建成功并获得高滴度的病毒感染液.通过慢病毒感染途径成功将HGF和Bax基因导入NIH3T3细胞并表达蛋白,为进一步研究Bax和HGF双基因共表达的重组慢病毒对血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞的影响奠定了基础.
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人肌细胞增强因子2C基因慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达
目的 构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)慢病毒表达载体并检测其表达性能,以便应用过表达技术进一步研究MEF2C的功能.方法 以人MEF2C基因序列为模板合成其编码框序列,通过限制性内切酶Not Ⅰ和Nsi Ⅰ酶切、T4 DNA连接酶连接,将MEF2C插入慢病毒载体质粒LV5-GFP,构建人MEF2C基因重组慢病毒质粒载体,转化感受态细菌,筛选阳性克隆,与包装质粒通过脂质体共转染人胚肾细胞系293T,进行慢病毒包装并测定病毒滴度.病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察感染效率,PCR方法检测MEF2C mRNA的过表达情况.结果 成功构建慢病毒表达载体LV5-MEF2C-GFP,三质粒共转染293T细胞后形成假慢病毒颗粒；浓缩假病毒后测定其滴度为2×109 TU/ml;以复感染系数MOI为5感染293T细胞,感染效率在70％以上.PCR证实感染带有目的基因假病毒的293T细胞表达MEF2C mRNA的水平较感染阴性对照病毒的293T细胞表达水平明显升高(=11.93,P=0.000).结论 成功构建MEF2C慢病毒表达系统,为应用过表达技术探索其在肿瘤发生和发展中的作用奠定了基础.
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人核小体结合蛋白1小分子干扰RNA重组慢病毒抑制非激素依赖性前列腺癌体内生长的实验研究
目的 探讨重组慢病毒介导的人核小体结合蛋白1(NSBP1)基因沉默对非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145移植瘤生长的抑制作用及机制.方法 慢病毒lentivirus-NSBP1 转染非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145.用转染细胞成瘤,观察抑瘤效果.运用实时RT-PCR 和Western blot 方法检测移植瘤中NSBP1、cyclinB1 与Bcl-2 的mRNA 和蛋白的表达.结果 体内实验证实NSBP1 表达水平的降低,对肿瘤细胞在裸鼠体内成瘤率没有影响,但对肿瘤的生长有明显抑制作用.同时随着NSBP1 表达水平的降低,cyclinB1 和Bcl-2 的mRNA 及蛋白的表达也降低.结论 NSBP1-RNAi-lentivirus 重组慢病毒能有效抑制DU145 细胞移植瘤的生长,NSBP1 可能通过调控cyclinB1、Bcl-2 基因的变化影响肿瘤细胞的生长.
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慢病毒介导的血红素加氧酶-1对脂肪干细胞在低氧无血清条件下的保护作用
目的：探讨慢病毒介导的血红素加氧酶-1（HO-1）对脂肪干细胞（ADSCs）在低氧无血清的条件下的保护作用。方法分离培养SD大鼠ADSCs，取第三代ADSCs分为五组：对照组；单纯低氧无血清组；空载体病毒组；HO-1组；HO-1＋ZnPP组。采用DAPI染色检测各组细胞凋亡率；Western blot法检测各组HO-1、Cleaved-Caspase-3的表达量。结果携带HO-1基因的慢病毒转染ADSCs（HO-1组）可明显增加ADSCs中HO-1的表达；ADSCs在缺氧状态下发生大量凋亡，其凋亡率为（27.29±1.18）%，转空载体的细胞凋亡率达（27.47±1.35）%，而转HO-1基因的ADSCs的凋亡率仅为（12.00±1.18）%，HO-1＋ZnPP组：凋亡率（25.52±2.98）%。与对照组相比，低氧无血清组与空载体病毒组ADSCs的Cleaved-Caspase-3的表达有显著升高（P＜0.05）；HO-1组Cleaved-Caspase-3的表达与低氧无血清组与空载体病毒组相比有明显下降（ P＜0.05）；而HO-1＋ZnPP组Cleaved-Caspase-3的表达又明显高于HO-1组（P＜0.05）。结论提高ADSCs中HO-1蛋白的表达可以通过降低凋亡效应因子Caspase-3的活性显著降低ADSCs在低氧无血清条件下的凋亡率。
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携带增强绿色荧光蛋白基因慢病毒载体标记兔滑膜间充质干细胞
目的：通过对携带增强绿色荧光蛋白（enhanced-green fluorescent protein，eGFP）基因的慢病毒载体系统的构建，感染兔滑膜间充质干细胞（synovial mesenchymal stem cells，SMSC），以获得稳定表达GFP的兔SMSC。方法在体外分离培养、纯化兔SMSC，通过Lipofectamine2000转染法将第三代慢病毒载体四质粒共转染293FT细胞产生慢病毒，收集、浓缩后进行滴度测定，对培养好的兔SMSC进行慢病毒感染，在荧光显微镜下观察GFP基因表达情况。结果第三代慢病毒四载体转染293FT细胞72 h可见到很强的GFP表达，收集、浓缩后测得病毒滴度为4.0×108 TU/ml，感染48 h后在荧光显微镜下可见约90%的兔SMSC标记上GFP基因。结论通过Lipofectamine2000转染法成功构建了第三代慢病毒高效率载体系统，且对兔SMSC感染效果良好，为以后兔SMSC的体内示踪标记奠定了基础。
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NSBP1调节非激素依赖性前列腺癌DU145细胞的凋亡和增殖
目的探讨重组慢病毒介导的人核小体结合蛋白1（NSBP1）基因沉默对非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145凋亡和增殖的调控机制。方法慢病毒lentivirus-shRNA-NSBP1转染非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145，MTT法检测细胞生长活性，流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期。 Western blot 方法检测敲减NSBP1蛋白后细胞中cyclinB1与BCL-2蛋白的表达。结果体外实验证实NSBP1表达水平的降低，对肿瘤细胞的生长有明显抑制作用，96 h细胞生长抑制率为22.6％。同时随着NSBP1表达水平的降低， cyclinB1和BCL-2的蛋白的表达也降低。结论 NSBP1-RNAi-lentivirus 重组慢病毒能有效抑制DU145细胞的生长，NSBP1可能通过调控cyclinB1、BCL-2基因的变化影响肿瘤细胞的生长。
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慢病毒介导环氧化酶-2的沉默对食管鳞癌细胞增殖的抑制效应
目的：制备环氧化酶-2（COX-2）的RNA干扰（RNAi）重组慢病毒（lentivirus），观察 COX-2表达沉默对人食管鳞癌（ESCC）细胞增殖的影响。方法将目的基因短发卡 RNA （shRNA）载体与包装载体共转染293T细胞，收集上清液后浓缩纯化、滴度测定、感染ESCC细胞；应用荧光显微镜观察包装效率及感染效率，实时荧光定量PCR及Western blot评价COX-2基因沉默效应，MTS 法检测细胞的增殖。结果成功制备了沉默 COX-2的重组慢病毒，该病毒感染 ESCC细胞后，COX-2 mRNA和蛋白的表达量分别降低了80%和50%左右，细胞的增殖明显减慢。结论慢病毒介导的shRNA干扰能有效沉默ESCC细胞COX-2基因，COX-2表达沉默抑制ESCC细胞增殖。
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增殖诱导配体基因短发夹RNA慢病毒表达载体的构建
目的 构建针对人的增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,并在感染293T细胞后检测病毒滴度及适合的感染复数(multiplicity of infection,MOI)值.方法 以人APRIL基因为靶点,筛选出3条shRNA靶序列:shAPRIL1210、shAPRIL1754、shAPRIL1604;各自合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA后分别与经酶切的pGEL-GFP载体连接,构建3个慢病毒表达载体LV-shAPRIL1210、LV-shAPRIL1754、LV-shAPRIL1604;将连接产物分别转化到DH5α感受态细胞,经PCR及DNA测序鉴定.再用LV-shAPRIL与包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白的表达水平确定病毒滴度及适合的MOI值.结果 PCR和测序结果与构建的3个慢病毒载体LV-shAPRIL1210、LV-shAPRIL1754、LV-shAPRIL1604的预期结果一致,经包装产生的慢病毒滴度分别为5×107、6×107、4×107转导单位(TU)/ml;适合高效感染的MOI值为5.结论 成功构建人APRIL基因3个慢病毒表达载体LV-shAPRIL,为后继的在相关靶细胞中诱导特异性的APRIL基因沉默奠定基础.
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胰腺癌CFPAC1细胞增殖诱导配体基因shRNA慢病毒表达载体的构建
目的 构建针对人胰腺癌细胞株CFPAC1增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因的shRNA慢病毒表达载体.方法 应用基因工程技术,筛选出针对APRIL基因的RNAi靶序列,与pGCL-GFP载体连接,构建慢病毒表达载体LV-shAPRIL;将连接产物转化到DHSα感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定.再用LV-shAPRIL、pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒.重组慢病毒感染CFPAC1细胞,实时定量PCR和Western blotting检测CFPAC1细胞APRIL mRNA和蛋白的表达.结果 PCR和测序结果与构建的慢病毒载体的预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为5×107TU/ml.构建的慢病毒载体感染CFPAC1细胞后第4天、第4周和第8周,APRIL mRNA表达量较空载体慢病毒感染组分别下降了73%、70%和71%;APRIL蛋白表达量分别下降了66%、63%和62%(P＜0.05).而各时间段未感染慢病毒的细胞组与空载体组相比无明显差异(P＞0.05).结论 成功构建了APRIL基因的shRNA慢病毒表达载体LV-shAPRIL.
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shRNA沉默增殖诱导配体基因抑制胰腺癌细胞生长的研究
目的 研究靶向增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)在体内外对胰腺癌细胞生长的影响,探讨其对胰腺癌基因治疗的可行性.方法 将前期构建的LV-shAPRIL感染CFPAC1细胞,MTY法及流式细胞技术分别检测CFPAC1细胞生长和凋亡.用CFPAC1细胞建立裸鼠移植瘤模型,观察瘤内注射LV-shAPRIL对瘤生长的影响.结果 LV-shAPRIL感染CFPAC1细胞96 h后,CFPAC1细胞的生长明显受抑制,与对照组及空载体组相比有显著差异(P＜0.05);同时细胞凋亡率为(17.35±0.96)%,明显高于对照组和空载体组(P＜0.05).将LV-shAPRIL局部注射到裸鼠移植瘤内,LV-shAPRIL组肿瘤生长明显比同期对照组和空载体组减缓;第27天LV-shAPRIL组肿瘤体积和重量分别为(821.8±123.3)mm3和(2.16±0.18)g,明显小于其他两组(P＜0.05).结论 靶向APRIL基因的慢病毒表达载体LV-shAPRIL在体内外抑制胰腺癌CFPAC1细胞的生长,为胰腺癌基因治疗探索新的思路.
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慢病毒介导PXR体内转染对CCl4诱导的大鼠肝损伤的保护作用研究
目的：探讨PXR对CCl4诱导的大鼠肝损伤的保护作用。方法雄性SD大鼠48只，随机分为4组，空白组不做任何处理；模型组通过CCl4灌胃诱导肝损伤；空载体组在建立肝损伤模型前3天静脉注射慢病毒空载体；PXR慢病毒组在建立肝损伤模型前3天静脉注射PXR重组慢病毒。通过血清AST和ALT检测和肝脏HE染色评估肝损伤程度；Western blot及RT-PCR检测大鼠肝组织中PXR、NF-κB、IL-1、IL-2和TNF-α的表达。结果慢病毒介导PXR体内转染后肝损伤大鼠血清AST和ALT明显降低，肝损伤及纤维化程度明显减轻，PXR表达水平明显升高，相反，NF-κB、IL-1、IL-2和TNF-α的表达水平明显降低。结论 PXR可能通过抑制NF-κB的表达，下调炎症相关因子IL-1、IL-2和TNF-α的表达，从而对CCl4诱导的大鼠肝损伤具有一定的保护作用，可为肝损伤的治疗提供一种新的途径和思路。
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抑制Nod样受体蛋白3减轻大鼠蛛网膜下腔出血后血脑屏障破坏和神经功能缺损的研究
目的 观察慢病毒介导的Nod样受体蛋白3(NLRP3)特异性RNA干扰对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后血脑屏障破坏及神经功能缺损的作用.方法 SD雄性大鼠44只,随机分为4组;假手术组(Sham组)8只,SAH组12只,阴性对照病毒组(LV-Control组)12只,NLRP3慢病毒干扰组(LV-shNLRP3组)12只;后3组均行血管内刺破法SAH造模.SAH后24h行Western blot、ABC/DAB染色、改良Garcia评分及平衡木实验,观察SAH造模24h后,4组大鼠NLRP3蛋白表达、血脑屏障结构成分表达、血脑屏障渗漏变化及神经功能缺损情况.结果 NLRP3在Sham组呈现低水平表达,SAH组及LV-Control组显著升高(P＜0.01);LV-shNLRP3组显著减少(P＜0.05).SAH组及LV-Control组血脑屏障完整性标记物(ZO-1、occludin、VE-cadherin)表达显著下降(P＜0.01);而LV-shNLRP3组显著升高(P＜0.05),且IgG渗出明显减少.结论 慢病毒介导的RNA干扰抑制NLRP3,能减轻大鼠SAH后血脑屏障破坏和神经功能缺损.
