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高尔基体蛋白73在肝细胞癌早期诊断及进展中的应用价值
目的 分析高尔基体蛋白73(GP73)并与甲胎蛋白(AFP)比较在肝细胞癌(HCC)中的临床诊断价值.方法 分别采用酶联免疫吸附试验和电化学发光免疫分析定量测定77例HCC、21例肝硬化、20例肝炎以及59例健康对照组血清GP73和AFP的水平,并进行分析比较.结果 HCC组血清GP73和AFP均显著高于肝硬化、肝炎及健康对照组(均为P＜0.05);早期HCC组血清GP73显著高于肝硬化组(P＜0.05),而血清AFP在两组中无明显差异(P＞0.05).GP73对HCC的诊断敏感度明显高于AFP(85.7％vs 62.3％,P＜0.05),两者联合检测可提高其诊断敏感度到90.9％.结论 GP73是一项很好的诊断和鉴别早期HCC的血清标志物,且可能对HCC进展的监测具有作用.AFP联合GP73检测可显著提高对HCC的临床诊断价值.
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重组腺相关病毒介导HLA-A2基因转导肝癌细胞增强杀伤性T细胞抗肿瘤免疫应答
目的 本研究旨在探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导HLA-A2基因转导肝癌细胞增强杀伤性T细胞(CTL)抗肝癌免疫应答.方法 利用携带人类甲胎蛋白(AFP)基因的rAAV(rAAV-AFP)转导人树突状细胞(DC)体外诱导AFP特异性抗肝癌CTL免疫应答.利用携带人类HLA-A2基因的rAAV(rAAV-HLA-A2)体外转导肝癌细胞提高HLA-A2分子表达水平,增强肝癌细胞对rAAV-AFP转导DC疫苗诱导的AFP特异性CTL免疫反应的敏感性.结果 rAAV-AFP转导DC疫苗能够有效诱导AFP特异性抗肝癌CTL免疫应答.rAAV-HLA-A2能够提高肝癌细胞HLA-A2分子表达,并增强肝癌细胞对rAAV-AFP转导DC疫苗诱导的CTL免疫反应的敏感性.结论 通过rAAV-HLA-A2提高肝癌细胞HLA-A2分子表达是增强CTL抗肝癌免疫应答的有效途径.为AFP表达阳性但HLA-class I分子表达低下的肝癌患者的主动性免疫治疗提供了新的解决方案.
关键词： 腺病毒科 甲胎蛋白类 树突细胞 肝肿瘤 人类白细胞抗原-A2 -
携带甲胎蛋白基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及其对靶基因的沉默效率
目的 构建携带甲胎蛋白(AFP)基因小干扰RNA(siRNA)的慢病毒载体并转染肝癌细胞,评价其对AFP基因的沉默效率.方法 设计和构建针对AFP基因的阳性siRNA及不针对任何已知基因的阴性siRNA,将其分别插入携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒载体,然后转染到表达AFP基因的人肝癌细胞HepG2并筛选阳性表达细胞株,分别为慢病毒转染阳性siRNA组和慢病毒转染阴性siRNA组.同时设立脂质体转染阳性siRNA组、脂质体转染阴性siRNA组以及加AFP siRNA而未用转染试剂的siRNA组、空白对照组.荧光显微镜观察评估转染效率,荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组HepG2细胞APF mRNA及蛋白的相对表达量,比较不同转染方法对AFP基因表达的抑制率.结果 慢病毒能够有效地转染siRNA到HepG2细胞内.荧光定量PCR显示慢病毒转染siRNA对AFP mRNA表达的抑制率显著高于脂质体转染siRNA(92.1％比74.3％,P＜0.05).免疫印迹亦显示慢病毒转染siRNA对AFP蛋白表达的抑制率显著高于脂质体转染siRNA(88.2％比63.7％,P＜0.05).结论 慢病毒转染AFP siRNA能够更有效地抑制HepG2细胞内AFP基因表达.
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抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测技术的建立
目的：制备、筛选多株具有商用价值的可配对的高特异性、高亲和力的抗人甲胎蛋白（hAFP）单克隆抗体，初步建立双抗体夹心 ELISA 检测方法。方法通过经典的淋巴细胞杂交瘤技术筛选分泌抗 hAFP单抗的杂交瘤细胞株；对筛选所得单抗的特性进行鉴定分析；双抗体夹心 ELISA 法筛选佳配对抗体；初步建立DAS-ELISA 检测方法并检测血样，绘制其标准检测曲线并与进口试剂盒比较。结果共获得12株稳定分泌抗 hAFP 单抗的杂交瘤细胞株，其中 Ab 1~Ab 55株单抗的腹水效价均高于600万， Ab 5的效价高达3000万；特异性鉴定结果表明 Ab 1~Ab 5均能够特异识别天然 hAFP 分子，但 Ab 5与人血清白蛋白（HSA）存在较强交叉反应；抗体配对实验共筛选出5对（Ab 1/HRP-Ab 2、Ab 1/HRP-Ab 4、Ab 3/HRP-Ab 2、Ab 3/HRP-Ab 4和 Ab 4/HRP-Ab 1）能够满足 hAFP 检测要求且无交叉反应的配对抗体，终确定 Ab 1+ Ab 3/HRP-Ab 2和 Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 4为佳配对组合；利用佳配对抗体组合建立标准检测曲线，其线性检测范围为5~250 ng/ml，低检测限2 ng/ml，检测上限400 ng/ml，优于进口试剂盒的线性范围5~200 ng/ml 和低检测限5 ng/ml；样检结果显示自制试剂盒的阳性血清检测准确率99.2%（119/120例），阴性血清准确率100%（40/40例）。结论筛选获得的4株高亲和力、高特异性抗 hAFP 单抗均可应用于 DAS-ELISA 试剂盒的研制，Ab 1和 Ab 3适合作为捕获抗体，Ab 2和 Ab 4适合作检测抗体；自制试剂盒的线性检测范围和低检测限均优于进口试剂盒，表明具有商用价值。
关键词： 甲胎蛋白类 抗体 单克隆 双抗体夹心 ELISA -
肝细胞癌375例临床病理和免疫表型分析
目的 探讨肝细胞癌的预后因素及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3( GPC3)、肝细胞抗原(HEP)、甲胎蛋白(AFP)、CD34及CD10蛋白表达的预后意义.方法 对375例肝细胞癌患者进行临床病理及预后分析,对其中80例肝细胞癌患者的石蜡标本以EliVision免疫组织化学染色法进行上述抗体染色,分析抗体表达与病理特征的关系,并进行生存分析.结果 肿瘤数目(P=0.000)、肿瘤大小(P=0.025)、分化程度(P =0.001)及血管浸润(P=0.000)均为与预后有关的因素.GPC3( 66/80,82.5％)、HEP( 64/80,80.0％)、AFP(38/80,47.5％)及CD10( 28/80,35.0％)表达与分化程度明显相关,其P值分别为0.002、0.021、0.014、0.002.GPC3表达还与肿瘤单发与多发、有无卫星灶相关,P =0.028.AFP、CD10的表达与脉管有无癌栓密切相关,P值分别为0.000、0.010.KaplanMeier法生存分析显示HEP低表达及AFP高表达者预后差.结论 肿瘤大小、数目、分化程度及血管浸润为肝细胞癌预后相关因素；HEP及AFP表达情况有明显的预后意义.
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免疫标志物在肝脏上皮性肿瘤诊断与鉴别诊断中的意义
目的 探讨精氨酸酶1 (Arg-1)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、Hepatocyte paraffin antigen 1(HepPar-1)及甲胎蛋白在原发性肝细胞癌、肝脏良性病变及肝脏转移癌中的表达情况及在诊断与鉴别诊断中的应用价值.方法 应用免疫组织化学EnVision二步法对3组病例,即85例肝细胞癌、35例肝脏良性病变及19例肝脏转移癌分别进行Arg-1、GPC3、HepPar-1和甲胎蛋白免疫组织化学标记,分析抗体的表达在肝脏肿瘤诊断、鉴别诊断中的应用价值.结果 Arg-1、GPC3、HepPar-1和甲胎蛋白在肝细胞癌、肝脏良性病变及肝脏转移癌中的阳性表达率分别为90.6％(77/85)、100％(35/35)和1/19; 82.4％(70/85)、0(0/35)和1/19;72.9％(62/85)、100％(35/35)和2/19; 47.1％(40/85)、0(0/35)和0(0/19).Arg-1敏感性高于甲胎蛋白及HepPar-1(P值分别为0.000,0.002),GPC3在肝细胞癌的诊断中具有较高的特异性(98.1％).结论 Arg-1是一个敏感的肝细胞标志物,对鉴别肝脏转移癌及转移到其他器官的肝细胞癌有重要作用;GPC3在肝细胞癌的诊断中具有较高的特异性,对肝细胞性肿瘤的良恶性判断有意义,此4种抗体对肝脏肿瘤的诊断和鉴别诊断及预后推测具有应用价值.
关键词： 肝肿瘤 精氨酸酶 磷脂酰肌醇蛋白聚糖类 甲胎蛋白类 -
甲胎蛋白异质体L3预警原发性肝癌的研究
目的 探讨甲胎蛋白异质体(AFP-L3)的检测在预警原发性肝癌中的作用.方法 对100例AFP升高肝病患者血清,应用甲胎异质体微量离心柱分离并洗脱获得AFP-L3,再同时检测原始血清中的AFP以及AFP-L3含量,计算AFP-L3在AFP中的比例,对AFP-L3异常升高者、正常者进行跟踪,结合6个月后临床诊断结果 ,分析AFP-L3升高在鉴别良性肝脏病变与预警肝癌中的作用.结果 肝癌、疑似肝癌患者与良性肝病患者中的AFP-L3阳性率差异有统计学意义(分别为81.80%、73.68%、11.80%,P＜0.05).未确诊肝癌(疑似HCC、肝病)的患者中,AFP-L3阳性的21例中有12例在6个月内被诊断为HCC,而且有6例是通过B超、CT等影像学手段被早期确诊的单发性小肝癌.AFP-L3阴性的62例标本中,6个月内有3例发生肝癌,AFP-L3阳性发生肝癌的危险率增加了11.9倍.结论 AFP-L3与AFP值无相关性,可以作为一个独立肝细胞癌诊断因子.AFP-L3的测定对于AFP升高时良、恶性肝病的鉴别及肝癌的早期预警诊断具有重要意义.
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微量离心柱法分离检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)及其临床意义
目的 探讨甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在肝细胞癌诊断中的意义.方法 应用预装有耦联小扁豆凝集素(LCA)的琼脂糖微量离心柱分离AFP-L3,采用双抗体夹心、化学发光法检测AFP和AFP-L3,并计算AFP-L3值,以AFP＞20 μg/L,AFP-L3＞10%作为阳性判断标准.结果 肝细胞癌患者血清中AFP、AFP-L3水平明显高于其他肝病患者,P值均＜0.001,肝癌患者以AFP、AFP-L3作为诊断指标的敏感度分别是85.1%、72.3%,特异度分别是55.4%、97.2%;8例肝病患者AFP-L3＞10%,影像诊断未发现肝癌,至少三个月以后确诊肝癌.结论 甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在肝细胞癌诊断及与良性肝病的鉴别诊断中具有重要价值.
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血清GP73、AFP和AFP-L3联合检测在原发性肝癌诊断中的价值
目的 探讨血清中高尔基体蛋白73( GP73)、甲胎蛋白(AFP)和甲胎蛋白异质体(AFP-L3)单独和联合检测对原发性肝癌(PHC)诊断的意义，为PHC诊断和普查提供一种新方法。方法采用ELISA对81例PHC、176例慢性肝炎和肝硬化、30例其他肿瘤疾病和40名健康人的血清GP73、甲胎蛋白异质体( AFP-L3)和AFP进行检测。结果 GP73、AFP和AFP-L3在肝癌组的敏感度分别为77.78％、62.69％和51.85％，在非肝癌组的特异性分别为84.55％、86.99％和96.34％。三者联合检测时，其诊断的敏感度可提高至88.89％。结论 GP73对PHC诊断具有较好的敏感度，AFP-L3具有较高的特异性。血清GP73、AFP和AFP-L3联合检测可有效提高PHC的临床诊断效果。
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血清标志物GP73在原发性肝癌诊断中的作用
目的 分析GP73在原发性肝癌诊断中的作用,探讨血清GP73和AFP联合检测对原发性肝癌诊断的意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测60例体检正常者(正常对照)、178例慢性肝炎或肝硬化(CH/LC)患者和194例原发性肝癌(PHC)患者血清中的GP73,同时采用电化学发光法检测血清中AFP的水平.结果 经Kruskal-Wallis检验正常对照组、CH/LC组和.PHC组GP73表达水平的差异有统计学意义(P ＜0.001)且PHC组的GP73水平明显高于CH/LC组(P ＜0.001).以ROC曲线确诊PHC的GP73临界值为190.7 ng/ml,AFP的临界值为35.2 ng/ml,单项检测时,GP73的敏感度和特异度分别为66.5％和86.6％,AFP的敏感度与特异度分别为58.8％和83.7％.GP73和AFP联合检测时敏感度与特异度分别为85.6％和81.5％.结论 GP73对PHC的诊断有较好的敏感度和特异性,血清GP73联合AFP检测能够有效地提高PHC的诊断效率.
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血清GP73检测在原发性肝癌诊断中的作用
目的 检测血清中高尔基体蛋白73(GP73水平),分析GP73指标对于原发性肝癌诊断的作用,探讨血清GP73水平和AFP联合检测对原发性肝癌诊断的临床价值.方法 采用酶联免疫吸附试验(E LISA)定量检测60例体检正常者,128例慢性肝炎和肝硬化(CH/LC)患者和96例原发性肝癌(PHC)患者血清中的GP73,同时采用电化学发光法检测血清中AFP的水平.结果 经统计分析,正常对照组、CH/LC组和PHC组GP73表达水平的差异有统计学意义(P＜0.05).GP73的敏感度和特异性分别为91.67％和95.21％,AFP的敏感度与特异度分别为73.96％和87.23％.GP73和AFP联合检测时敏感度与特异性分别为96.52％和87.46％.结论 GP73对PHC的诊断有较好的敏感度和特异性,血清GP73联合AFP检测能够有效地提高PHC的诊断效率,可用于PHC高危人群的普查.
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血清中甲胎蛋白异质体L3含量与肝癌分期及大小的相关性
目的 探讨原发性肝癌患者血清中的甲胎蛋白异质体L3(AFP-L3)水平与肝癌分期和癌灶大小的相关性.方法 随机选取162例原发性肝癌(PHC)患者的血清,分别进行总甲胎蛋白(AFP)和AFP-L3的纯化和检测,并计算AFP-L3的百分含量后与患者的癌灶大小和肝癌分期进行相关性分析.结果 PHC患者血清AFP-L3百分含量与癌灶大小呈正相关(r=0.332,P=0.009),与肝癌分期不相关(r=0.121,P=0.189).结论 AFP-L3的测定对于判断癌灶的大小具有一定的临床意义.
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离心柱法检测甲胎异质体在预测TACE术后疗效的研究
目的 探讨微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体在原发性肝癌患者行肝动脉化疗栓塞术疗效预测的作用.方法 收集28例行TACE术治疗的肝癌患者,通过测定TACE治疗前后AFP和AFP-L3水平,比较血清AFP-L3％变化与TACE术疗效之间的关系.结果 28例行TACE治疗的肝癌患者,11例AFP-L3％下降组中有8例患者疗效好,17例AFP-L3％未下降组中只有5例患者疗效好,差异有统计学意义(x2=4.858,P＜0.05).结论 微量离心柱法检测AFP-L3对于TACE疗效的判断具有重要的临床应用价值.
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甲胎蛋白异质体L3对低浓度甲胎蛋白肝癌诊断的临床意义
目的 探讨在低浓度甲胎蛋白(AFP)肝病患者中,甲胎蛋白异质体L3(AFP-L3)的百分含量(AFP-L3％)对肝癌的早期诊断和疗效评估的临床意义.方法 收集245例血清低AFP含量(5 ～40 ng/ml)的肝病患者样本(其中肝硬化患者100例、肝癌患者145例),检测AFP-L3％,并对其中100例肝硬化患者和20例肝癌术后患者分别进行3个月和12个月的随访.结果 以AFP-L3％≥10％作为阳性判断标准,100例肝硬化患者中阳性为23例,经3个月随访后其中8例诊断为肝癌;145份肝癌患者血清AFP-L3％阳性率为46.2％ (67/145).低浓度AFP肝癌组的AFP-L3％水平显著高于低AFP肝硬化组(t=7.318,P=0.001 ＜0.01);20例肝癌患者术后有5例AFP-L3％仍为阳性,其在12个月内的生存率为0,而术后AFP-L3％阴性患者生存概率为15/15.结论 AFP-L3％在低浓度AFP肝病患者中对肝癌的早期诊断和术后疗效评估都具有一定的临床意义.
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微量离心柱法与亲和交叉免疫电泳法检测甲胎蛋白异质体的研究
目的 比较微量离心柱法和亲和交叉免疫电泳自显影法两种方法 检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)对甲胎蛋白阳性的良恶性肝病鉴别诊断价值.方法 采用微量离心柱法和亲和交叉免疫电泳自显影法分别分析102例原发性肝癌、41例慢肝及肝硬化血清中的AFP-L3比率,比较2种方法 检测AFP-L3%对良恶性肝病鉴别诊断价值.结果 微量离心柱法和亲和电泳法对102例原发性肝癌AFP-L3%的敏感性分别是79.4%、91.2%.对41例慢肝、肝硬化AFP-L3%的特异性分别为70.7%、29.3%.亲和电泳法、微量离心柱法两种方法 检测肝癌的符合率分别为76.9%、73.4%,在ROC曲线下的面积AUC分别为0.791、0.758.4例AFP低值的原发性肝癌,采用亲和电泳方法 检测均为阴性,而采用微量离心柱方法 检测均为阳性.结论 微量离心柱法检测AFP-L3不仅操作简便、省时,而且比传统亲和电泳方法 更适合于AFP阳性良恶性肝病的鉴别诊断.
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GP73与AFP联合检测在肝癌诊断中的应用价值
目的 通过检测HCC血清中的GP73和AFP含量,探讨GP73对于肝癌检测的应用价值.方法 通过ELISA方法对81例HCC、72例CH/LC和65例正常对照血清行GP73检测,并通过ROC曲线计算GP73诊断肝癌的敏感性和特异性.结果 HCC组、CH/LC组和正常对照组GP73含量分别为( 152.67±33.59) ng/ml、(93.15±20.02) ng/ml和(58.95±17.29) ng/ml.ROC曲线分析显示以120 ng/ml为Cut-off值,GP73诊断肝癌的敏感性为77.80％,特异性为78.00％.结论 GP73可以作为诊断肝癌的血清标志物,其敏感性好于AFP,同时通过联合检查可以提高肝癌的检出率,有一定的临床意义.
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亲和吸附纯化甲胎蛋白异质体方法的建立
目的 利用小扁豆凝集素(LCA)建立基于微量离心柱的甲胎蛋白异质体L3(AFP-L3)的纯化方法.方法 采用硫酸铵分级沉淀的方法由小扁豆中提取凝集素,偶联到活化的琼脂糖凝胶4B(sephrose 4B)上,灌注离心柱,制备AFP-L3亲和吸附离心管.血清加入离心管后经吸附和洗脱,便可获得纯化的AFP-L3.随机选取10例AFP阳性患者血清,应用亲和吸附纯化法纯化AFP-L3后应用电化学发光法检测,并与传统的亲和免疫电泳方法相比较.结果 10例患者血清经纯化后,AFP-L3检测结果有8例＞5 ng/ml,亲和免疫电泳有6例呈现阳性反应.结论 成功建立基于微量离心柱的亲和吸附纯化AFP-L3的方法,该方法具有较高的灵敏度,重复性好并且操作简便更利于临床实验室应用.
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肝细胞肝癌患者血清AFP-IgM复合物表达水平及其临床意义
目的 探讨肝细胞肝癌(HCC)患者血清甲胎蛋白-IgM免疫复合物(AFP-IgM)的表达水平及其临床意义.方法 应用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测79例HCC患者、20例中度肝硬化患者和30例健康对照者血清中AFP-IgM水平,并进行对比分析.结果 AFP-IgM的浓度和阳性率分别为HCC组422.20×103AU/L和73%,肝硬化组268.85×103AU/L和20%,健康对照组119.71×103AU/L1和7%.HCC组阳性率显著高于肝硬化组和健康对照组(分别P＜0.01);Ⅰ期和Ⅱ期HCC AFP-IgM阳性率(分别为89%和88%)高于Ⅲ期(30%,P＜0.05);AFP-IgM的水平与肿瘤分期、大小有关.结论 血清AFP-IgM对HCC的早期诊断具有重要意义,有望成为一个有用的辅助诊断HCC的生物标志.
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甲胎蛋白阴性和阳性原发性肝细胞癌的超声特征比较
目的 对比观察甲胎蛋白(AFP)阴性和阳性的原发性肝细胞癌(HCC)的超声特点.方法 收集经病理确诊的HCC患者103例,其中AFP阴性43例,AFP阳性HCC 60例,对比分析二者超声及CEUS表现.结果 常规超声:AFP阴性HCC多数大径≤3 cm(32/43,74.42％),单发(38/43,88.37％),形态较规则(31/43,72.09％),回声多均匀(33/43,76.74％),多数肿瘤内无坏死、出血(34/43,79.07％),以中心血流丰富为主(31/43,72.09％),多数(29/43,67.44％)未发生转移或侵犯周围组织器官;AFP阳性HCC多数肿瘤大径＞3 cm (37/60,61.67％),单发(37/60,61.67％),形态不规则(41/60,68.33％),多呈不均匀回声(39/60,65.00％),易发生坏死、出血(49/60,81.67％),以周边血流丰富为主(39/60,65.00％),易发生转移或侵犯周围组织器官(33/60,55.00％).AFP阳性和阴性HCC上述超声表现差异具有统计学意义(P均＜0.05).CEUS:AFP阴性HCC多呈“快进慢出”(19/29,65.52％),AFP阳性HCC多呈“快进快出”(33/44,75.00％),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AFP阴性与阳性HCC超声表现具有一定差异,可通过超声初步评估AFP表达水平.
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甲胎蛋白阴性肝细胞癌的CT特征
目的 探讨甲胎蛋白(AFP)阴性肝细胞癌(HCC)的CT特征,旨在提高临床诊断准确率.资料与方法 回顾性分析124例经手术病理证实为HCC患者的术前CT资料,其中AFP阴性组53例,AFP阳性组71例.比较两组CT表现,包括肿瘤发病部位、数量、大小、强化模式,是否有包膜、脉管瘤栓、肝内转移、淋巴结转移、肝硬化、门静脉高压、腹水.结果 AFP阴性组中,CT强化模式表现为“快进快出”21例(39.6％)、“慢进快出”32例(60.4％);肿瘤＜3 cm 20例(37.7％),3～5 cm 12例(22.6％),≥5 cm21例(39.6％),合并肝硬化3例(5.7％),脉管瘤栓8例(15.1％);发生在肝右叶35例(66.0％),肝左叶14例(26.4％),肝左、右叶3例(5.7％),肝门部1例(1.9％);单发47例(88.7％),多发6例(11.3％);有包膜2例(3.8％),肝内转移1例(1.9％),淋巴结转移5例(9.4％),门静脉高压2例(3.8％),腹水2例(3.8％).与AFP阳性HCC组比较,肿瘤大小、脉管瘤栓、肝硬化差异有统计学意义(P＜0.05);发病部位、数量、强化模式、包膜、肝内转移、淋巴结转移、门静脉高压、腹水差异均无统计学意义(P＞0.05).结论AFP阴性HCC强化模式表现为“快进快出”或“慢进快出”,与AFP阳性HCC类似,但其肿瘤体积较小,较少合并肝硬化及脉管瘤栓.
