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亲和吸附纯化甲胎蛋白异质体方法的建立
目的 利用小扁豆凝集素(LCA)建立基于微量离心柱的甲胎蛋白异质体L3(AFP-L3)的纯化方法.方法 采用硫酸铵分级沉淀的方法由小扁豆中提取凝集素,偶联到活化的琼脂糖凝胶4B(sephrose 4B)上,灌注离心柱,制备AFP-L3亲和吸附离心管.血清加入离心管后经吸附和洗脱,便可获得纯化的AFP-L3.随机选取10例AFP阳性患者血清,应用亲和吸附纯化法纯化AFP-L3后应用电化学发光法检测,并与传统的亲和免疫电泳方法相比较.结果 10例患者血清经纯化后,AFP-L3检测结果有8例＞5 ng/ml,亲和免疫电泳有6例呈现阳性反应.结论 成功建立基于微量离心柱的亲和吸附纯化AFP-L3的方法,该方法具有较高的灵敏度,重复性好并且操作简便更利于临床实验室应用.
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高效价冷凝集素致ABO血型正向定型错误1例
1 病例报告女,58岁.因肝硬化重症肝炎来我院就诊,因病情需输同型血浆200 ml支持治疗,抽取患者静脉血3 ml,用EDTA-K2抗凝,送输血科检查血型,以备合血.
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骨髓增生异常伴冷凝集素引发配血困难1例分析
由低温抗体(冷凝集素)引起的血型鉴定及配血困难在临床较常见,骨髓增生异常患者血清中冷凝集素升高引起配血困难比较少见,现将我们所遇1例分析如下.
关键词： 骨髓增生异常综合征 凝集素类 血型鉴定和交叉配血 病例报告[文献类型] -
胆管癌组织及其胆汁糖蛋白末端唾液酸结构的改变及其意义
目的探讨胆管癌组织及其胆汁糖蛋白N-型糖链末端唾液酸的结构特点及意义.方法采用半定量RT-PCR法,分析35例胆管癌和35例良性胆管组织唾液酸转移酶ST6Gal-Ⅰ和ST3Gal-Ⅲ mRNA的表达;采用能识别末端唾液酸结构的麦胚凝集素(WGA),对良恶性标本进行WGA组织化学染色,并进行图像分析;对各良恶性胆汁进行WGA点印迹分析.结果胆管癌组织中ST3Gal-Ⅲ和ST6Gal-ⅠmRNA表达均增强(P<0.01),以ST3Gal-Ⅲ明显;胆管癌组织WGA阳性率为100%(35/35),良性组织为43%(15/35),胆管癌WGA强度指数高于良性对照组(P<0.01);胆管癌组织WGA指数与ST3Gal-Ⅲ mRNA表达正相关,二者均与TNM分期、肿瘤分化、转移等有关;恶性病变胆汁WGA点印迹阳性率(83%)高于良性病变胆汁(17%),且与胆管癌组织WGA指数有关.结论胆管癌细胞糖蛋白末端唾液酸含量增加,并发生连接键型的变化,具有特征性,与胆管癌生物学特性有关;在分泌的胆汁中也可检测到糖蛋白末端唾液酸含量增加.
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甲状旁腺素(1-34)对破骨细胞抑制性凝集素表达的调节及信号转导机制
目的 探讨甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)(1-34)对UMR106成骨细胞表达破骨细胞抑制性凝集素(osteoclast inhibitory lectin,OCIL)基因mRNA的调节及其信号转导机制.方法 培养大鼠UMR106成骨细胞,采用PTH(1-34)及蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、钙离子、MAPK通路的激动剂或阻断剂干预细胞不同时间后,收集细胞提取总RNA,实时荧光定量PCR检测OCIL mRNA的表达水平.结果 PTH(1-34)以剂量和时间依赖方式促进OCIL mRNA表达.10 nmol/L PTH(1-34)作用6h后促进OCIL mRNA表达,24 h上调效应显著,约为对照组[未加入PTH(1-34)]的2.8倍.PTH(1-34)对OCIL mRNA表达促进作用的起始时间及高峰时间均晚于其对RANKL的诱导和对OPG的抑制.蛋白激酶A通路激动剂福司可林(FSK)、双丁酰基环腺苷磷酸(db-cAMP)及钙离子载体A23187均不同程度促进OCIL mRNA表达,大上调效应分别约为对照组的4.2、4.5和5.1倍.蛋白激酶C激动剂佛波酯(PMA)作用早期(2～6 h)抑制OCILmRNA表达,作用6h后大抑制率达50％;PMA作用后期(24 h)对OCIL mRNA的抑制作用逆转为促进效应.PKA阻断剂KT5720、钙调蛋白(CaMK)阻断剂W-7、钙调蛋白激酶Ⅱ阻断剂KN-62及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)阻断剂PD98059均下调PTH(1-34)诱导的OCIL mRNA表达,大抑制率分别为56％、61％ 、63％和50％.各信号通路间存在交互作用.MAPK通路阻断剂PD98059减少PKA激动剂FSK或db-cAMP诱导的OCIL mRNA表达,抑制率分别为98％和63％;但不影响A23187诱导的OCIL mRNA水平增高.结论 PKA通路、钙/钙调蛋白通路和MAPK通路可介导PTH(1-34)诱导的OCIL mRNA表达.
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天津地区人群中LOX-1基因3'-UTR多态性与冠心病的关系
目的:研究天津地区人群中凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)3’-非编码区(3'-UTR)188位点基因多态性情况,探讨LOX-1基因多态性与冠心病(CAD)及血脂水平的关系.方法:冠心病组170例,均经冠脉造影(CAG)确诊；对照组140例,均经CAG排查.应用聚合酶链反应-限制片段长度多态性(PCR-RFLP)法对研究对象的LOX-1基因3'-UTR 188位点多态性进行分析,并用自动生化分析仪检测血浆血脂水平.结果:冠心病组和对照组比较,LOX-1基因3'-UTR 188位点基因型频率和等位基因频率差异均无统计学意义(均P＞0.05)；在总研究对象中T等位基因携带者(CT+TT)与CC基因型者血三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、脂蛋白(a)[Lp(a)]水平差异均无统计学意义(均P＞0.05),冠心病组与对照组中的CT+TT基因型者以上血脂水平差异亦无统计学意义(P＞0.05).结论:天津地区人群中LOX -1基因3'-UTR 188位点多态性与冠心病的发病及血脂水平均无明显关系,其不能作为冠心病的预测因素.
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反复呼吸道感染患儿甘露糖结合凝集素与T细胞亚群的研究
儿童反复呼吸道感染是儿科的常见病、多发病,给儿童的身心健康、家庭和社会带来极大的危害.它是国内部分地区5岁以下儿童死亡的3个主要原因之一.尤其是基层医院儿童反复呼吸道感染的患者非常多,占门诊总量的60％以上.该疾病病因复杂,经研究发现除营养、环境污染、护理、生活习惯及其他罕见的原发性免疫缺陷病等与反复呼吸道感染发病密切相关外,甘露糖结合凝集素水平低下与T细胞免疫功能紊乱是造成患儿反复呼吸道感染的主要原因.
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Ax亚型伴高冷凝集素引起配血不合
Ax亚型在临床上十分少见,因其抗原性弱,给血型鉴定和交叉配血造成一定困难,加之高冷凝集素的干扰,极易引起错误输血而发生严重的溶血性输血反应.现将1例Ax亚型伴冷凝集素增高的血清学检测结果报告如下.
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系统性红斑狼疮病人甘露糖结合凝集素基因多态性和血清水平的研究
目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)病人甘露糖结合凝集素(MBL)基因多态性及血清水平与疾病的关系.方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测44例SLE病人和45名正常人MBL外显子1的第54密码子的多态性(GGC/GAC),同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中MBL的含量.结果 S比病人GGC/GGC型71%(31/44),GGC/GAC型27%(12/44),GAC/GAC型2%(1/44);正常人MBL基因型分布频率GGC/GAC型78%(35/45),GGC/GAC型22%(10/45);两组相比,分布差异无显著性.不同基因型S比病人血清MBL水平分别为(1.8±0.6)mg/L(31例),(1.5±0.6)mg/L(12例),1例GAG/GAC型血清M肌水平为1.17 mg/L;正常人血清MBL水平分别为(3.0±1.0)mg/L(35例),(2.2±1.0)mg/L(10例).正常人GGC/GGC型和GGC/GAC型血清MBL水平均明显高于SLE病人组(P<0.01,P<0.05).结论 SLE病人的血清MBL水平明显减低,但似与基因第54号密码子变异无相关性.
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凝集素在食管上段胃黏膜异位症中的表达及意义
目的 比较不同种类凝集素在食管上段异位胃黏膜及正常食管组织中表达,利用凝集素受体在食管黏膜分布情况来推断食管上段异位胃黏膜的来源.方法 收集取自2011年1月至2015年12月山西医科大学汾阳医院消化内科47例食管上段胃黏膜异位症患者组织及其相应的正常食管组织;分别以DBA,LCA,BSA一抗,应用链霉卵白素过氧化物酶法(SP法)进行免疫组织化学染色;观察DBA、LCA、BSA在食管上段异位胃黏膜组织中的表达特征.分析食管上段胃黏膜异位症患者临床特征.结果 与正常食管组织及胃窦组织比较,DBA、LCA、BSA 3种凝集素表达减少.与食管下段Barrett食管组织比较,3种凝集素表达下降.结论 DBA、LCA、BSA 3种凝集素可能在食管上段异位胃黏膜组织发生、发展中起作用,为进一步研究食管上段胃黏膜异位症的发生机制提供思路.
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甘露糖结合凝集素血清浓度在慢性风湿性心脏病发病中的临床意义
目的 建立人甘露糖结合凝集素血清浓度的检测方法 ,探讨慢性风湿性心脏病与甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)血清浓度之间的关系.方法 采用亲和色谱法提取纯化人MBL蛋白,免疫新西兰兔获取兔抗人MBL抗血清,ELISA方法 和Western blot方法 鉴定其效价和特异性.ELISA方法 检测65例慢性风湿性心脏病病人和51名正常人的血清MBL浓度,进行统计学分析.结果 抗血清效价为1∶3 200,Western blot方法 鉴定该抗血清能特异性识别人血浆中MBL蛋白,在相对分子质量为32 000处显示单一条带.慢性风湿性心脏病病人和正常人血清MBL浓度分别为(1.2±0.7) mg/L和(1.5±0.9) mg/L,(P＜0.05).以平均症状出现年龄为界(34.0岁)分为大小两个症状出现年龄组,其血清MBL浓度分别为(1.5±0.8) mg/L和(0.8±0.5) mg/L,(P＜0.01).结论 血清MBL水平低下可能是风湿性心脏病的一个易感因素,同时也可能是病情发展的促进因素.
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张家口地区回族中小学生甘露糖结合凝集素基因外显子I 52位密码子基因频率特征分析:与汉族健康人群的对照
目的:了解张家口地区回族中小学生甘露糖结合凝集素基因外显子I52位密码子基因突变频率.方法:[1]于2003-08选择张家口地区康保县处长地乡回族中学和米家营小学回族学生100人,男61人,女39人.于2003-10张家口市中心血站献血人员169人作为对照,男122人,女47人,均为汉族.所有纳入对象均为健康人群,且对检测指标均知情同意.[2]进行甘露糖结合凝集素外显子I 52位密码子基因突变的序列特异性引物聚合酶链式反应检测.[3]计数资料差异比较采用χ2检验.结果:[1]回族人群100人,汉族人群169人,均进入结果分析,无脱落者.[2]回族中小学生100人,野生型为100人(100%);基因频率CGT为1.汉族人群169名汉族人52位密码子的野生型为161人(95.3%),突变杂合型为8例(4.7%),基因频率分别为CGT为0.976 3;TGT为0.023 7.回族中小学生甘露糖结合凝集素外显子I 52位密码子基因度明显低于汉族人群(P＜0.05).结论:血清甘露糖结合凝集素外显子I 52位密码子的点突变频率在不同的民族略有差异,汉族突变度显著高于回族.
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甘露糖结合凝集素与感染性疾病
甘露糖结合凝集素(MBL)是一种钙调节依赖糖结合蛋白,属于凝集素家族,是一种血清C型凝集素,在固有免疫应答中发挥重要的免疫防御作用.MBL主要由肝细胞合成,少数来源于巨噬细胞、多形核白细胞、内皮细胞、成纤维细胞等.MBL与病原微生物如细菌、真菌、病毒、寄生虫等表面的糖类结构结合,并且通过MBL补体激活途径发挥调理作用,导致病原体裂解,亦可清除循环免疫复合物,在免疫监视和免疫防御中具有重要意义.鉴于血清MBL低下或缺失与临床感染性疾病密切相关,故有必要对MBL进行深入研究.
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儿童甘露聚糖结合凝集素遗传缺陷
甘露聚糖结合凝集素(MBL)是一种钙离子依赖的C型血清凝集素,它可以选择性识别结合病原体表面的末端含甘露聚糖、N-乙酰葡萄糖胺的糖基,通过凝集素通路激活补体,或直接作为调理素介导调理噬菌作用,也可直接与病毒结合,中和病毒并抑制其扩散.MBL在天然免疫中起着重要作用,尤其对免疫机能发育尚未成熟的婴幼儿其作用更为重要.MBL基因突变是儿童天然免疫缺陷的一个危险因子,有三种突变型:G54D,G57E/Q和R52C.基因突变破坏了MBL分子的多聚化组装,使其不稳定,易降解,血清中浓度下降,活性受损,患儿可表现出对感染的易感性增加,或伴发其他免疫缺陷病.对严重或频发感染的患儿进行MBL血清浓度的检测及其基因突变的筛查,有助于诊断和治疗.国外已报道用纯化正常人血浆MBL治疗MBL遗传缺陷,重建调理噬菌功能.
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甘露糖结合凝集素基因多态性与隐球菌病易感性的遗传关联研究
目的 分析我国非AIDS隐球菌病患者甘露糖结合凝集素(MBL)基因多态性分布情况,并探讨其与隐球菌病易感性的关系.方法 采用病例一对照遗传关联研究,病例组为非AIDS相关隐球菌病患者167例,包括隐球菌脑膜炎103例和肺隐球菌感染64例,健康对照组为体检者208例.提取受试者外周血标本基因组DNA,PCR特异性扩增MBL基因DNA片段,对扩增产物进行序列分析,以检测MBL单核苷酸多态性(SNP),进一步探讨MBL基因多态性与隐球菌病易感性的遗传关联性.病例组与对照组比较采用χ2检验或Fisher确切概率检验,MBL基因型各组血浆MBL差异比较采用单因素方差分析.结果 167例隐球菌病患者MBL各等位基因、单倍型、基因型所占比例与健康对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).但是,隐球菌脑膜炎患者MBL基因型缺陷组的构成比(16.5%)显著高于健康对照组(8.7%,χ2=4.25,P=0.0392,OR=2.09),在免疫正常隐球菌脑膜炎患者中(21.4%)差异更为显著(χ2=7.15,P=0.0075,OR=2.88).此外,隐球菌脑膜炎患者MBL基因型缺陷组的构成比显著高于非中枢神经系统感染患者(3.1%,Fisher确切概率检验,P=0.010,OR=6.13),在免疫正常患者中(分别为21.4%和4.0%)差异更为显著(P=0.009,OR=6.55).结论 MBL基因型缺陷是隐球菌脑膜炎的遗传易感因素,MBL缺陷的隐球菌病患者中枢神经系统更易受累.
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过表达ITLN-1能抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖并诱导其凋亡
目的:观察过表达肠凝集素1(intelectin 1,ITLN-1)对子人宫内膜腺癌Ishikawa细胞凋亡和增殖的影响.方法:采用脂质体法将重组质粒pCMV6-ITLN-1转入Ishikawa细胞(ITLN-1过表达组),同时设未做任何处理的细胞作为空白对照组和转入空载体pCMV6-N1的空载体组.48h后,应用实时荧光定量PCR法检测ITLN-1、p53、环氧合酶2(cyclooxygenase-2,Cox-2)和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN) mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测ITLN-1、p53、Cox-2、Bcl-2及cleaved-caspase 3蛋白的表达水平.采用MTS法检测细胞的增殖活性;FCM法检测细胞的凋亡率,倒置相差显微镜下观察凋亡细胞形态的变化.结果:ITLN-1、p53和PTEN mRNA的表达水平均较空白对照组和空载体组明显上调(P＜0.01、P＜0.05和P＜0.01),而Cox-2 mRNA的表达水平则明显下调(P＜0.01).p53和cleaved-caspase 3蛋白的表达水平均明显上调(P值均＜ 0.01),Bcl-2和Cox-2蛋白的表达水平均明显下调(P值均＜0.01).与2个对照组相比,24和48 h时ITLN-1过表达组Ishikawa细胞的生长受到明显抑制(P＜0.05和P＜0.01),细胞凋亡率明显提高(P＜0.01),倒置相差显微镜下细胞形态呈凋亡改变.结论:ITLN-1表达上调能抑制Ishikawa细胞的增殖,并诱导其凋亡,这可能与上调Ishikawa细胞中凋亡相关蛋白的表达有关.
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尖锐湿疣患者皮损Toll样受体4、9和C型凝集素受体的表达
目的探讨初发和复发尖锐湿疣(CA)患者皮损中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达及意义.方法采用免疫组化SP法检测30例初发CA皮损、30例复发CA皮损和20例正常人皮肤(包皮)中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达及分布.结果初发CA皮损和复发CA皮损中TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达水平均显著高于正常包皮组织(P<0.001),且集中分布于基底层和棘层细胞.TLR4、TLR9和DC-SIGN三者在初发CA皮损和复发CA皮损中的表达差异均无统计学意义(三者均P>0.05).TLR4、TLR9与DC-SIGN的表达均呈正相关性关系.结论 TLR4、TLR9和DC-SIGN的表达增强可能在CA的发病和复发过程中起到一定作用.
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甲胎蛋白异质体作为肝癌标志物的临床应用
甲胎蛋白(AFP)是一个单链糖蛋白.1970年Purves对肝癌病人血清作凝胶电泳时先观察到AFP有不同的迁移率.随着生物化学及其相关分析技术的进展与应用,发现AFP分子与外源性凝集素的亲和力不同,即存在不均一性的糖链异质性.后来,通常将氨基酸序列相同,而糖链或蛋白质等电点不同的AFP称为AFP异质体(AFP variants).通过大量研究,证实AFP分子糖链异质性与其组织器官来源有关,不同生理病理状况可产生不同的糖链结构,并且具有肿瘤特异性.
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Galectin-1在大肠癌细胞系中的表达及意义
目的 探讨Galectin-1在大肠癌细胞系中的表达情况,以及与大肠癌侵袭、转移的关系.方法 用Real time-RT PCR法和免疫组织化学法分析Galectin-1mRNA及蛋白在5种大肠癌细胞系的表达情况；用Boyden小室法比较5种大肠癌细胞系的侵袭转移能力.结果 Galectin-1在大肠癌转移灶来源的细胞系中的表达高于大肠癌原发灶来源的细胞系(P＜0.01)；Boyden小室的结果显示大肠癌转移灶来源的细胞系的侵袭,转移能力高于大肠癌原发灶来源的细胞系.结论 Galectin-1的高表达可能与大肠癌的侵袭转移有一定关系.
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花生凝集素受体在急性上颌窦炎粘膜的表达及意义
目的利用已建立的实验动物模型,探讨花生凝集素(PNA)受体在急性上颌窦炎粘膜中的表达及意义. 方法将急性炎症标本及正常鼻窦粘膜标本行凝集素亲和组织化学ABC法染色. 结果对照组鼻窦粘膜染色基本阴性,炎症粘膜呈弱阳性.N-PNA(预先经神经氨酸酶处理后再进行PNA染色)染色均显著加深. 结论上颌窦急性炎症期,花生凝集素受体的表达发生改变,这种改变可能一方面是致病菌侵袭的结果,另一方面是机体局部抵抗炎症的重要防御因素之一.
