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半饱血雌蜱文献资料
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镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA文库的构建
目的为了筛选抗蜱及蜱传疾病基因工程疫苗的抗原候选分子,构建了镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库.方法用Trizol试剂提取镰形扇头蜱半饱血雌蜱总RNA,经反转录合成cDNA第一链,应用长链PCR(LD-PCR)扩增方法,合成双链cDNA.双链cDNA(ds cDNA)在SfiⅠ内切酶的作用下,形成两端分别带有SfiⅠA和SfiⅠB的粘性末端.经CHROMA SPIN-400柱纯化,收集500bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有SfiⅠA和SfiⅠB末端的λTriplEx2噬菌体载体,经体外包装后,以XL1-Blue为受体菌构建cDNA噬菌体表达文库.结果经测定,库容量为4.2×106,重组率为96%.扩增后的文库滴度为2.04×1010pfu/ml.通过对文库中随机挑选的15个克隆进行序列分析,获得一个编码线粒体ATP酶第6亚基蛋白的全长cDNA序列.结论结果显示,镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库已构建成功.
