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恶性疟原虫Pf12基因重组质粒DNA接种诱导小鼠的免疫应答
目的观察重组质粒 VR1012-Pf12 DNA直接免疫接种诱导BALB/c小鼠所产生的免疫应答,分析Pf12基因的抗原性和作为疫苗抗原候选分子的可能性.方法构建重组质粒VR1012-Pf12,直接免疫BALB/c小鼠,通过NK细胞杀伤活性、脾T淋巴细胞增殖水平、ELISA、体外抑虫试验测定,观察其诱导的细胞和体液应答以及体外抑虫效果.结果重组质粒VR1012-Pf12免疫BALB/c小鼠,NK细胞杀伤活性、脾T淋巴细胞增殖水平明显高于对照组(P＜0.01),诱导小鼠产生的抗体水平明显增高(P＜0.01),免疫血清在体外能抑制恶性疟原虫的生长、发育.结论重组质粒 VR1012-Pf12 DNA直接免疫接种诱导BALB/c小鼠产生一定水平的体液和细胞免疫应答,其免疫血清在体外对恶性疟原虫的生长、发育有明显的抑制作用.
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恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因体外扩增、克隆及序列分析
目的 构建恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因原核表达质粒pET28α-Pf12，测定Pf12基因序列，并为FCC1/HN株Pf12的体外表达奠定基础。方法采用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增出Pf12基因，扩增产物经纯化后，用BamHI+XhoI双酶切，定向克隆入pET28α质粒，转化大肠杆菌DH5α，再用BamHI+XhoI酶切及PCR扩增对重组子进行鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定，并应用PCGENE软件进行同源性比较及预测抗原表位。结果筛选出编码FCC1/HN株Pf12基因的原核表达质粒pET28α-Pf12，FCC1/HN株Pf12基因序列与FMG株高度同源，Pf12基因序列中可能存在抗原表位。结论pET28α-Pf12重组质粒的构建，为恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因的体外表达奠定基础。
