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LeftyA文献资料
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LeftyA基因重组慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的：想构建LeftyA基因的慢病毒表达载体，鉴定其在293T细胞中的表达。方法首先扩增LeftyA基因序列，将其与慢病毒骨架载体连接后，鉴定慢病毒表达载体构建成功。将重组慢病毒表达载体质粒及包装质粒共转染293T细胞，鉴定慢病毒转染并包装成功。结果 LeftyA基因成功转导至以GV287为骨架质粒的慢病毒系统中，包装后测定病毒滴度达2．0×108 TU／ml，免疫印记法检测到LeftyA蛋白在293T细胞中的表达。结论成功构建了携带人LeftyA基因的慢病毒表达系统。
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LeftyA真核表达载体的构建及其对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响
目的 构建pcDNA3.1-LeftyA真核表达载体,观察其对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化(EMT)的影响.方法 基因克隆技术构建pcDNA3.1-LeftyA真核表达载体,将其瞬时转染HK-2细胞,TGF-β1(10μg/L)刺激后,观察细胞形态变化,检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因及蛋白的表达.结果 TGF-β1刺激后HK-2细胞内E-cadherin mRNA和蛋白时间依赖性表达下调,α-SMA mRNA和蛋白时间依赖性表达上调,同时E-cadherin表达变化早于α-SMA;LeftyA蛋白可以显著抑制E-cadherin蛋白的下调表达(P＜0.05),其表达比同时间点单纯刺激组高17.6%;同时可逆转α-SMA蛋白的上调表达(P＜0.05),其蛋白表达比单纯刺激组低14.0%.结论 LeftyA蛋白可以抑制TGF-β1所致的EMT.
