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mTORC1信号通路在小鼠化疗胃黏膜损伤中的作用
目的 探讨mTORC1信号通路在使用化疗药物白消安(BU)+环磷酰胺(CY)后小鼠胃黏膜损伤中的作用.方法 将60只C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,即正常对照组,BU+CY组,Rapamycin组和BU+CY+Rapamycin组,每组15只.各组分别于造模后2、6和14 d处死小鼠后取胃体进行常规HE染色观察病理变化,采用免疫组织化学方法检测小鼠胃黏膜的BrdU阳性细胞和PS6阳性蛋白的表达,用Tunnel方法检测细胞凋亡,用图像分析仪进行体视学测量和图像分析.结果 BU+CY组小鼠胃黏膜损伤明显,并有大量炎症细胞浸润;BU+CY+Rapamycin组小鼠上述损伤明显减轻.与正常对照组比较,BU+CY组胃黏膜BrdU阳性细胞数密度显著降低(P<0.01),BU+CY+Rapamycin组则基本恢复至正常值;BU+CY组胃黏膜凋亡细胞显著增加(P<0.01),BU+CY+Rapamycin组则明显恢复;BU+CY组PS6免疫阳性蛋白的积分光密度明显增高(P<0.05),提示mTORC1通路被激活,BU+CY+Rapamycin组则显著减少,mTORC1通路受到强烈抑制;Rapamycin组可出现BrdU阳性细胞数密度降低、凋亡细胞增加.结论 化疗药物BU+CY可激活mTORC1信号通路、抑制胃黏膜上皮干细胞增殖和促进胃黏膜上皮细胞凋亡引起胃黏膜损伤,且这种损伤可被Rapamycin 逆转.
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重组人S100钙结合蛋白A4诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞产生血管内皮生长因子的机制研究
目的 探讨重组人S100钙结合蛋白A4(rhS100A4)诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RAFLSs)产生血管内皮生长因子(VEGF)的机制. 方法 取行膝关节置换术的类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜组织行体外RAFLSs培养;CCK-8法检测rhS100A4及其与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1 (mTORC1)信号通路抑制剂雷帕霉素(Rap)共同作用对RAFLSs增殖的影响;免疫荧光法检测rhS100A4及其与Rap共同作用对RAFLSs表达VEGF的影响;rhS100A4及其与Rap共同作用刺激RAFLSs形成条件培养基(CM),观察CM刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外形成管腔的作用,检测S100A4血管生成能力;Western blot检测rhS100A4对RAFLSs mTORC1信号通路下游蛋白核糖体蛋白S6(S6)磷酸化水平的影响,分析rhS 100A4与Rap共同作用对RAFLSs S6蛋白磷酸化水平及VEGF蛋白表达的影响. 结果 rhS100A4促进RAFLSs增殖及VEGF蛋白水平表达,rhS100A4所形成CM促进HUVECs体外形成血管,Rap可抑制rhS100A4的上述生物学效应;rhS100A4激活RAFLSs mTORC1信号通路下游蛋白S6,使其磷酸化水平升高;rhS 100A4增强RAFLSs细胞S6蛋白磷酸化水平及VEGF蛋白水平表达的作用可被Rap抑制.结论 S100A4通过激活mTORC1信号通路促进RAFLSs产生VEGF.
关键词： 关节炎 类风湿 钙结合蛋白质类 血管内皮生长因子类 mTORC1信号通路
