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甘草苷对人膀胱癌T24细胞p21、PTEN的表达影响
目的:探讨甘草苷(Liquiritin,LQ)对膀胱癌细胞T24 p21、PTEN的表达影响及其可能的抗癌机制.方法:实验分组:实验分为对照组,LQ20 μg/mL,50 μg/mL,100 μg/mL组.用RT - PCR和RT - qPCR检测p21、PTEN的mRNA表达,Western blot检测LQ对T24细胞内p21、PTEN蛋白的表达影响.结果:与对照组比较,LQ 20 μg/mL,50 μg/mL,100 μg/mL组PTEN mRNA和蛋白表达均升高,LQ50 μg/mL,100 μg/mL组p21mRNA表达升高,LQ 20 μg/mL,50μg/mL,100 μg/mL组p21蛋白表达明显升高,差异有统计学意义.结论:LQ能诱导T24细胞p21、PTEN的表达,其抗癌机制可能与此相关.
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siRNA沉默膀胱癌T24细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的研究
目的 研究siRNA对膀胱癌细胞T24 DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的沉默作用.方法 将筛选出的siRNA转染入膀胱癌T24细胞分为空白组、脂质体组、阴性对照组和siRNA组,分别运用RT-PCR、Western blot检测转染后不同时段DNMT1 mRNA水平、蛋白水平变化.结果 筛选出的siRNA转染膀胱癌T24细胞DNMT1 24 h开始出现mRNA减少,24 h、48 h、72 h分别降至(66.05±4.87)％、(39.36±4.53)％和(40.86±4.81)％(P＜0.05).转染后24 h、48 h、72 h蛋白水平分别降至(90.21±3.68)％、(71.45±3.44)％和(67.74±3.38)％(P＜0.05).结论 siRNA能有效地沉默膀胱癌细胞T24 DNMT1的表达.
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5-氮杂胞嘧啶核苷联合hepaCAM腺病毒通过抑制p-AKT诱导膀胱癌细胞T24凋亡
目的:研究5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azacytidine,azac)联合肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)腺病毒对膀胱癌细胞T24凋亡的影响及可能机制的探讨.方法:7种不同因素分别处理培养的膀胱癌细胞T24,hoechst 33258染色检测各处理组细胞凋亡率,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞早期凋亡率,RT-PCR检测hepaCAM及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,bcl-2) mRNA的表达,Western blot检测hepaCAM、p-AKT、total-AKT、bcl-2蛋白的表达.结果:hoechst 33258显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞凋亡率为(45.21±0.06)％,明显高于hepaCAM腺病毒组(15.60±0.02)％和azac组(26.30±0.02)％,差异有统计学意义(P=0.003,P=0.008);FCM显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞早期凋亡率为(16.05±0.06)％,明显高于hepaCAM腺病毒组(3.90±0.02)％和azac组(9.67±0.02)％,差异有统计学意义(P=0.002,P=0.043);RT-PCR显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac与hepaCAM腺病毒联用可以上调hepaCAM mRNA的表达(P=0.004,P=0.000),下调bcl-2 mRNA的表达,差异有统计学意义(P=0.026,P=0.030);Western blot显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac联合hepaCAM腺病毒组可上调hepaCAM蛋白的表达(P=0.003,P=0.003),同时下调p-AKT(P=0.001,P=0.005)和bcl-2(P=-0.000,P=0.002)蛋白的表达,差异有统计学意义.结论:azac联合hepaCAM腺病毒可能通过抑制p-AKT的磷酸化水平加速诱导T24细胞凋亡,可为膀胱癌的治疗提供新的思路.
