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人高亲和力IgE受体α链文献资料
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人高亲和力IgE受体α链基因克隆及表达
目的:克隆人高亲和力IgE受体α链基因,并进行原核表达,制备出可溶性FсεRIα蛋白.方法:应用RT-PCR技术,从皮肤组织的总RNA中扩增人高亲和力IgE受体α链基因,连接至PUCmT载体,重组克隆进行DNA测序.将测序证实的目的片段与高效表达载体pET30a连接,构建重组质粒并转入表达宿主菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化.结果:RT-PCR扩增出一个约950bp的DNA片段,测序结果显示该片段与GenBank上登录的FcεRIα基因序列完全一致;经原核表达后,获得相对分子质量37 000的FсεRIα融合蛋白.结论:本实验成功克隆、表达了人FcεRIα基因,制备出可溶性FcεRIα蛋白,为抗FcεRIα抗体的检测及自身免疫性慢性荨麻疹发病机制的研究提供了条件.
关键词： 基因克隆 基因表达 人高亲和力IgE受体α链 自身免疫性慢性荨麻疹
