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VP8*文献资料
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轮状病毒VP4蛋白酶切片段VP5*、VP8*在原核系统中的表达
目的 克隆表达轮状病毒结构蛋白VP4酶切片段VP5*、VP8*.方法 以猴轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RT-PCR方法 获得VP5*、VP8*全长基因片段cDNA,将其重组于pET-30 a表达载体,转化大肠杆菌BL21(plyss),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物做SDS-PAGE和Western-blotting检测,目的 产物用镍柱纯化.结果 ①重组载体在IPTG诱导下,工程菌表达的两个目的 蛋白主要以包涵体形式存在;②SDS-PAGE检测表达产物与目的 蛋白大小一致,VP5*为60 kD,VP8*为28 kD,Western-blotting检测发现两目的 蛋白所带标签可与抗体反应;③镍柱纯化获得RV SA11 VP5*、VP8*蛋白,纯度达90%.结论 ①构建表达载体pET-30a-VP5*、pET-30a-VP8*;②表达、纯化VP4蛋白的VP5*、VP8*片段.
