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tRNAser文献资料
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人tRNAser基因真核表达质粒的构建及对FRL-19肝癌细胞的高效转染
目的:构建人tRNAser(CGA)基因与真核表达载体pSV2neo的重组体,探讨细胞高效转染新方法,研究tRNA种类及丰度对转录后翻译水平的影响;为探索基因治疗新思路打下基础.方法:EcoRI酶切pGEM-Teasy tRNAser(CGA)质粒释放目的基因tRNAser(CGA)片断,与pSV2neo载体构成重组体,双酶消化鉴定重组载体插入方向.扩增纯化构建的pSV2neo tRNAser(CGA)质粒,经脂质体和Plus试剂混合包装,转染FRL-19肝癌细胞株.用Hirt方法提取胞浆DNA,做Southern blot.结果:用Nsil和BamHI双酶切鉴定获得正确方向的重组质粒pSV2neo tRNAser(CGA),DNA测序显示其序列正确.Southern blot结果显示:在400bp处可见一条特异DNA条带,说明pSV2neo tRNAser(CGA)已转入FRL-19细胞.结论:成功构建人pSV2neo tRNAser(CGA)真核表达质粒.Plus试剂可明显提高脂质体转染FRL-19细胞的效率.
