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人肾脏系膜细胞内mRNA稳定因子HuR蛋白对细胞周期蛋白cyclinD1转录后表达的调节
目的 观察人肾脏系膜细胞在血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)刺激下mRNA稳定因子人类抗原R(HuR)蛋白对细胞周期蛋白D1( cyclinDl)蛋白的作用.方法 体外培养人肾脏系膜细胞,根据AngⅡ对其的刺激时间即0、3、6、9、24 h分别记为0A、3A、6A、9A、24A组.应用流式细胞仪检测0A组与24A组细胞周期；免疫细胞化学方法观察各组HuR蛋白的亚细胞定位变化；Western blot方法检测各组全细胞与胞质内HuR蛋白及全细胞cyclinD1表达水平；RT-PCR方法检测各组cyclinD1的RNA水平.干扰RNA方法观察抑制HuR蛋白表达后AngⅡ刺激下对全细胞cyclinD1表达的保护效应.结果 与0A组比较,24A组细胞增殖趋势明显；HuR蛋白亚细胞定位从胞核转移到胞质,其中3A组变化显著；全细胞HuR蛋白表达水平不变,胞质内HuR蛋白表达增强,其中3A组显著(P＜0.05)；cyclinD1蛋白表达增强,其中24A组显著(P＜0.05),而RNA水平保持不变(P＞0.05).与转染前相比,干扰RNA转染后3A组胞质HuR蛋白表达明显减弱(P＜ 0.05)；24A组cyclinD1蛋白表达明显减弱(P＜0.05),而RNA水平不变(P＞0.05).结论 ①AngⅡ可刺激人肾小球系膜细胞增殖；②AngⅡ刺激下人肾脏系膜细胞核内HuR蛋白向胞质内转移；③HuR蛋白参与AngⅡ刺激下cyclinD1蛋白表达过程.
关键词： 人肾脏系膜细胞 血管紧张素Ⅱ HuR蛋白 CyclinD1蛋白 干扰RNA -
叶酸抑制同型半胱氨酸诱导的人肾脏系膜细胞增殖
目的 观察叶酸对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的人肾脏系膜细胞增殖作用的影响及其可能机制.方法 人肾脏系膜细胞采用含5％胎牛血清的RPMI1640培养,采用不同浓度Hcy(200、400、600、800、1 000μmol/L)处理细胞,MTT法观察Hcy对人肾脏系膜细胞增殖的影响.选取理想的Hcy浓度,加入不同浓度叶酸(50、100、200、400 μmol/L)处理细胞,观察叶酸对细胞增殖的干预作用.相同方法处理细胞后提取总蛋白,Western blot检测转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和纽胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)表达.结果 Hcy能诱导人肾脏系膜细胞的增殖,促进TGF-β和ERK蛋白表达,呈现剂量依赖性.叶酸干预后能抑制Hcy诱导的细胞增殖,下调TGF-β和ERK蛋白表达.结论 叶酸能抑制Hcy诱导的人肾脏系膜细胞增殖,可能与抑制TGF-β和ERK蛋白表达有关.
