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pBV220'载体文献资料
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hKGF 2在不同原核载体中的构建、表达和纯化分析
目的 比较人角质细胞生长因子2(hKGF2)在不同原核表达载体和宿主茵中的表达及相应蛋白纯化及生物学活性.方法 RT-PCR法从培养的人胚胎肺成纤维细胞提取成熟hKGF2 cDNA,克隆测序后,分别与pBV220和pET-30a(+)表达载体连接,转化不同宿主茵进行诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及western blot进行蛋白鉴定.针对不同原核表达载体分别用阳离子交换层析和镍亲和层析(Nj-NTA)纯化目的 蛋白,电泳分析蛋白纯化结果 ,并分别检测其生物学活性.结杲目的 基因片段克隆入pBV220 载体后在E.coli JM109中表达量高.约占茵体总蛋白的15%;克隆入pET-30a(+)载体在E.coli BL21(DE3)中表达量约占茵体总蛋白的25%;均为可溶性表达,不同方法 纯化后蛋白纯度达95%以上,均能有效促进人胚胎肾上皮细胞增殖.结论 hKGF2基因在不同的宿主茵中蛋白表达不同,以融合蛋白表达纯化效果更好.
