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miR-23b转染宫颈癌干细胞顺铂化疗敏感性变化及其机制
目的 观察微小RNA-23b(miR-23b)转染对宫颈癌干细胞(CD133+CaSki细胞)顺铂(CDDP)化疗敏感性的影响,并探讨其机制.方法 流式细胞术分选宫颈癌细胞系CaSki中的CD133+CaSki细胞,荧光定量PCR检测CD133+CaSki细胞和宫颈癌非干细胞(CD133-CaSki细胞)中的miR-23b,并预测其靶基因.将CD133+CaSki细胞分为mimics组、NC组、空白对照组,mimics组转染miR-23b模拟物(miR-23b mimics),NC组转染miR-23b阴性对照物(miR-23b NC),空白对照组不做任何处理,之后分别加入不同浓度的CDDP,CCK-8法检测CDDP对各组CD133+CaSki细胞的半数抑制浓度(IC50).Western blotting法检测CD133+CaSki、CD133-CaSki、转染miR-23b mimics的CD133+CaSki细胞中乙醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)蛋白.将人胚胎肾细胞系HEK-293T分为wt组、mut组、空载体组,wt组转染miR-23b mimics、内参质粒SV40、pmirGLO-ALDH1A1-3′-UTR wt(野生型)荧光素酶质粒,mut组转染miR-23b mimics、内参质粒SV40、pmirGLO-ALDH1A1-3′-UTR mut(突变型)荧光素酶质粒,空载体组转染miR-23b mimics、内参质粒SV40、pmirGLO空载体质粒,采用双荧光素酶试验检测各组细胞中转染质粒编码蛋白的萤光强度.结果 CD133+CaSki、CD133-CaSki细胞中miR-23b的相对表达量分别为0.29±0.05、1.09±0.14,两者相比,P<0.01;miR-23b的预测靶基因为ALDH1A1基因.CDDP对mimics组、NC组、空白对照组细胞的IC50分别为(8.18±1.02)、(13.98±1.48)、(14.15±1.27)μg/mL,mimics组与NC组和空白对照组相比,P均<0.05.CD133+CaSki、CD133-CaSki、转染miR-23b mimics的CD133+CaSki细胞中ALDH1A1蛋白相对表达量分别为0.29±0.06、0.12±0.03、0.13±0.04,ALDH1A1蛋白在CD133+CaSki细胞中的相对表达量与CD133-CaSki细胞和转染miR-23b mimics的CD133+CaSki细胞相比,P均<0.05.HEK-293T细胞中,wt组、mut组、空载体组转染质粒编码蛋白的萤光强度分别为0.41±0.06、1.12±0.15、1.02±0.15,wt组转染质粒编码蛋白的相对荧光强度与mut组和空载体组相比,P均<0.05.结论 在CD133+CaSki细胞中,miR-23b表达水平降低,CDDP的IC50升高,AL-DH1A1蛋白表达增加;CD133+CaSki细胞转染miR-23b后,CDDP的IC50降低;HEK-293T细胞转染miR-23b后,抑制ALDH1A1基因表达.
