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miR-155在3-oxo-C12-HSL阻碍人单核细胞源性树突状细胞成熟过程中的表达变化
目的 探讨miR-155在N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(3-oxo-C12-HSL)阻碍人单核细胞源性树突状细胞(Mo-DCs)成熟过程中的表达变化.方法 分离正常人外周血CD14+单核细胞,经重组人粒-单核细胞集落刺激因子和重组人IL-4诱导分化为Mo-DCs.将不成熟Mo-DCs分为阴性对照组、模型组、实验组1、实验组2,阴性对照组加入同体积PBS,模型组加入终浓度为1μg/mL的LPS,实验组1和实验组2分别加入终浓度为1μg/mL的LPS后分别加入终浓度为50μmol/L和100μmol/L的3-oxo-C12-HSL,处理48 h.采用流式细胞术检测各组Mo-DCs表型(CD80、CD40、CD11c和HLA-DR),酶联免疫吸附法检测细胞培养上清细胞因子(IL-12、IL-10)水平,荧光定量PCR检测miR-155表达.结果 与阴性对照组相比,模型组CD80、CD40、HLA-DR表达高,IL-10水平低,IL-12水平高,miR-155表达高(P均<0.05).实验组1、实验组2与模型组相比,实验组2与实验组1相比,CD80、CD40、HLA-DR表达低,IL-10水平高,IL-12水平低,miR-155表达低(P均<0.05).结论 miR-155在3-oxo-C12-HSL阻碍人Mo-DCs成熟过程中表达降低,3-oxo-C12-HSL可能通过降低miR-155表达阻碍Mo-DCs成熟.
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3-O-C12-HSL通过PPARγ抑制Mo-DCs表达IL-6
目的 研究铜绿假单胞菌分泌的N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(N-3-oxododecanoyl-L-homoserine lactone,3-O-C12-HSL)是否通过过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferater-activated receptorγ,PPARγ)调节单核细胞来源的树突细胞(monocytes derived-dendritic cells,Mo-DCs)表达白细胞介素6(interleukin-6,IL-6).方法 PPARγ配体筛选实验体外检测3-O-C12-HSL是否与PPARγ结合.免疫磁珠法分选人CD14+单核细胞,人白细胞介素4(human Interleukin 4,hIL-4)及人粒单核细胞集落刺激因子(human granulocyte monocyte colony stimulating factor,hGM-CSF)诱导分化为Mo-DCs,不同浓度的3-O-C12-HSL处理Mo-DCs;PPARγ拮抗剂GW9662处理Mo-DCs后,3-O-C12-HSL处理Mo-DCs,电化学发光法检测Mo-DCs培养上清IL-6浓度.结果 配体筛选实验显示3-O-C12-HSL＞ 4.60 μmol/L时可竞争性结合PPARγ配体结合区.3-O-C12-HSL下调脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的Mo-DCs表达IL-6水平(P＜0.05),PPARγ特异性拮抗剂GW9662能部分逆转3-O-C12-HSL介导的IL-6表达下调(P＜0.05).结论 3-O-C12-HSL可与PPARγ相结合,并通过PPARγ调节Mo-DCs分泌表达IL-6.
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3-O-C12-HSL阻碍Mo-DCs成熟过程中lncRNA表达谱的变化
目的:观察铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerltginosa,PA)分泌的信号分子N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(N-3-oxododecanoy1-L-homoserine lactone,3-O-C12-HSL)阻碍单核细胞来源的树突细胞(monocytes derived-dendritic cells,Mo-DCs)成熟过程中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达谱的变化情况.方法:采用免疫磁珠法分选人外周血CD14+单核细胞,经重组人粒-单核细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4诱导分化为Mo-DCs.不同因素处理Mo-DCs,实验组加入终浓度0.1 μg/mL的LPS和口终浓度为40 μmol/L的3-O-C12-HSL,对照组加入相应体积的含0.1％DMSO的PBS,模型组加入终浓度0.1 μg/mL的LPS.利用lncRNA芯片技术检测对照组、模型组和实验组间lncRNA表达谱的差异.对筛选数据进行分析处理,利用散点图分析2倍以上差异lncRNA在各处理因素间的总体变异情况,利用聚类分析研究表达差异5倍以上lncRNA的聚类情况.结果:与对照组和模型组相比较,实验组筛选出2倍以上表达差异的lncRNA为1 386条,其中上调表达的548条,下调表达的838条.筛选出具有5倍以上表达差异的lncRNA共153条,占2倍表达差异lncRNA的11.04％,其中上调表达的22条,下调表达的131条.散点图发现2倍表达差异的lncRNA总体分布呈集中趋势,存在特征性改变.聚类分析发现5倍表达差异的lncRNA能根据处理因素进行有效的分层聚类.结合GO分析和mRNA通路分析,差异lncRNA的相关基因可富集至PPAR信号通路、钙信号通路和NF-κB信号通路中.结论:3-O-C12-HSL作用于Mo-DCs后,lncRNA表达谱发生了特征性变化,表达差异的lncRNA可能参与了3-O-C12-HSL阻碍Mo-DCs成熟过程.
