首页 > 文献资料
-
miR-495在骨肉瘤细胞中表达变化、对MG-63细胞增殖的影响及其机制
目的 观察miR-495在骨肉瘤细胞中的表达变化及其对骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响,并探讨可能的分子机制.方法 采用real-time PCR法检测人骨肉瘤细胞系Saos-2、U20S、MG-63及人成骨细胞hFOB1.19中的miR-495.将MG-63细胞分为阴性对照组、miR-495 mimics组、miR-495 mimics+HMGA2组,分别转染mimics-NC、miR-495 mimics、miR-495 mimics+HMGA2表达质粒,转染24、48、72、96 h后,采用CCK-8法检测MG-63细胞增殖能力.应用靶基因在线预测数据库miRanda并结合基因的功能分析进行miR-495的靶基因预测.采用双荧光素酶报告实验验证miR-495与靶基因的结合位点.采用Western blotting法验证miR-495对高迁移率族蛋白A2(HMGA2)表达的靶向调控作用.结果 Saos-2、MG-63、U20S细胞中miR-495的相对表达量低于hFOB1.19细胞(P均<0.01).转染48、72、96 h后miR-495 mimics组MG-63细胞OD值低于阴性对照组组,miR-495 mimics+HMGA2组MG-63细胞OD值高于miR-495 mimics组(P均<0.01).双荧光素酶报告实验结果提示miR-495可与HMGA2的3′UTR区特异性结合,从而显著抑制荧光素酶活性.miR-495 mimics组MG-63细胞中HMGA2蛋白的相对表达量低于mimics-NC组,miR-495 mimics+HMGA2组MG-63细胞中HMGA2蛋白的相对表达量高于miR-495 mimics组(P均<0.01).结论 骨肉瘤细胞中miR-495的表达水平低于正常成骨细胞;上调miR-495表达后骨肉瘤细胞增殖受到抑制;miR-495可能通过靶向调控HMGA2表达从而抑制骨肉瘤细胞的增殖.
