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重组人IFN-α联合顺铂对MG-63细胞凋亡及侵袭转移潜能的影响
能力(P＜0.05).结论 rhIFN-α对MG-63细胞的增殖抑制效应具有剂量依赖性特点,且不同剂量rhIFN-α均能促进MG-63细胞对顺铂的敏感性并可抑制MG-63细胞的侵袭转移.
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白藜芦醇抑制骨肉瘤细胞系MG-63细胞增殖和迁移及其机制研究
目的 验证白藜芦醇是否可以抑制骨肉瘤细胞系MG-63增殖和迁移及其信号通路.方法 用不同浓度白藜芦醇干预骨肉瘤细胞,细胞分为对照组(只加入DMEM高糖培养基),10 μmol/L白藜芦醇,30μmol/L白藜芦醇和100 μmol/L白藜芦醇.划痕试验和Transwell试验测细胞迁移和侵袭;MrTT法测细胞增殖;Western blot法检测与细胞迁移和侵袭密切相关的蛋白基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)、与细胞增殖密切相关的蛋白(P21,P27),以及AKT和p-AKT的表达情况.结果 相比于对照组,白藜芦醇组骨肉瘤细胞增殖减少,P21和P27表达增加(P＜0.01);细胞迁移减弱,MMP-2和MMP-9表达减少(P＜0.01);p-AKT表达减少(P＜0.01).白藜芦醇的作用随剂量的增加而增加.结论 白藜芦醇通过抑制Pi3K/AKT信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移.
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联合应用LY294002和表柔比星对骨肉瘤细胞株MG63的研究
目的 探究使用表柔比星联合磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B(PI3K／Akt)信号通路抑制剂LY294002对体外培养骨肉瘤细胞MG63的影响.方法 以不同浓度及组合的药物处理MG63细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖状况;利用流式细胞术检测药物对MG63凋亡率;采用免疫蛋白印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶( caspase)-3等凋亡相关蛋白表达.结果 CCK-8检测结果显示,与对照组相比表柔比星(EPI)和LY294002对MG63的生长均有抑制作用,两者联合使用的抑制作用更加显著并呈现剂量依赖性.流式细胞术的结果表明LY294002(20μM)的凋亡率为(32.1 ±3)%,EPI(10μM)的凋亡率为(21.5 ±2)%,两者合用于细胞后可显著引起细胞凋亡,细胞凋亡率为(65.2 ±5)%(P＜0.01).免疫蛋白印记法结果显示随着两药联用的浓度增加,活化的凋亡蛋白Cleaved PARP,Cleavedcaspase-3 表达显著增加( P＜0.01).结论LY294002可以增强表柔比星对MG63细胞的生长抑制作用并且促进其凋亡,机制可能是通过半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶依赖性的细胞凋亡途径发挥作用.
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17β-雌二醇及Wnt／β-catenin信号通路对人成骨肉瘤细胞基质Gla蛋白表达的影响
目的：观察17β-雌二醇（17β-E217β-estradiol）对骨肉瘤细胞（osteosarcoma MG 63）基质Gla蛋白（MGP Matrix GLA protein）表达的影响及Wnt／β-catenin信号通路在其中的作用，探讨MGP在骨质疏松症发病过程中的可能机制。方法17β-E210－10、10－8、10－6mol／L及雌激素受体抑制剂氟维司群（Faslodex简称ICI）10－7 mol／L， ICI 10－7 mol／L ＋17β-E210－8 mol／L干预MG63细胞48 h。用10－8 mol／L的17β-E2及200 ng／mL Wnt／β-catenin信号通路阻断剂Dickkopf1分泌蛋白-1（ DKK-1）干预MG63细胞48 h。用10－8 mol／L 17β-E2及MGP抑制剂华法林10μmol／L干预MG63细胞48 h。干预后的细胞提取蛋白及总RNA，后用荧光定量PCR及Westernblotting观察MGP、β-catenin、Runx2、LRP5蛋白及基因的表达。结果17β-E2能上调MGP的表达，10－10、10－8、10－6 mol／L 17β-E2干预后， MGP mRNA的表达是对照组的4.63、7.16、2.95倍（ P＜0.05）， MGP蛋白的表达分别是对照组的1.17、1.58、1.28倍（ P＜0.05），以10－8 mol／L 17β-E2的作用明显。 ICI 能阻断17β-E2对MGP的上调作用，与单用17β-E2相比，差异有统计学意义（ P＜0.05）。17β-E2能增加Wnt／β-catenin经典信号通路中相关蛋白的表达，β-catenin及Runx2 mRNA及蛋白的表达与对照组相比，差异有统计学意义（ P＜0.05）。DKK-1则阻断17β-E2对MGP、β-catenin、 Runx2、 LRP5的上调作用，与对照组相比，差异有统计学意义（ P ＜0.05）。华法林可阻断17β-E2的作用，与对照组相比 MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的表达均下调，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论17β-E2调节成骨肉瘤细胞内Wnt／β-catenin信号通路同时也调节MGP表达，该作用可能是骨质疏松症发病的机制之一。
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1,25(OH)2D3对人骨肉瘤MG63细胞基质GLA蛋白及Wnt信号通路的影响
目的 观察1,25(OH)2D3对人成骨肉瘤MG63细胞株Wnt信号通路及MGP表达的影响,探讨其在骨质疏松发病中可能的新机制.方法 分别使用10-8 mol/L 1,25(OH)2D3、200 ng/ml Wnt信号通路阻断剂DKK-1、10-8 mol/L 1,25(OH)2D3+200 ng/ml DKK-1干预人骨肉瘤细胞MG63细胞株48 h,使用实时荧光定量RT-PCR及western-blot技术测定Wnt/β-catenin信号通路中相关因子β-catenin、Runx2、LRP5及MGP基因及蛋白表达的影响.结果 (1)10-8 mol/L 1,25(OH)2D3上调MG63细胞中Wnt/β-catenin信号通路中相关因子β-catenin、Runx2、LRP5及MGP的基因表达及蛋白的表达,其中上调基因分别是对照组的2.73倍、3.72倍、1.53倍、2.31倍,差异有统计学意义(P＜0.05);上调蛋白表达分别是对照组的1.13倍、1.17倍、1.14倍、1.21倍,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)DKK1下调β-catenin、LRP5、Runx2、MGP的基因及蛋白表达,其中下调基因表达分别是对照组的0.34倍、0.52倍、0.42倍、0.78倍,差异有统计学意义(P＜0.05).下调蛋白表达分别是对照组的0.93倍、0.92倍、0.87倍、0.86倍,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 1,25(OH)2D3有可能通过Wnt/β-catenin信号通路影响MGP的表达.
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1,25双羟维生素D3和染料木素对人成骨样SaOS-2细胞的作用
目的 研究1,25双羟维生素D3[1.25-(OH)2D3]及染料木素(genistein)对人成骨样SaOS-2细胞的作用.方法 培养人成骨样SaOS-2细胞,经1,25-(OH)2D3、genistein及二者联合应用后,用硝基苯磷酸二钠法(p-nitrophenylphosphate,pNPP)测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ALP及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA水平的变化.免疫印记法测定OPG蛋白表达.结果 1,25-(OH)2D3及genistein可显著提高ALP活性,但对ALP mRNA的表达没有影响.二者联合应用有协同作用,可显著提高ALP活性及mRNA的表达(P＜0.01).1,25-(OH)2在D3组可显著降低OPG mRNA及蛋白的表达,而与genistein共用时,此抑制作用消失(P＜0.01).结论 1,25-(OH)2D3及genistein在促进人成骨样SaOS-2细胞的分化过程存在协同作用,genistein通过调控OPG基因及蛋白的表达抑制1,25-(OH)2D3对破骨细胞的促进作用,从而促进骨的形成.
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特异性谷氨酸受体拮抗药非诺班对骨肉瘤LM7细胞增殖与凋亡的影响及其机制
目的 探讨特异性谷氨酸受体拮抗药非诺班对骨肉瘤细胞LM7增殖及凋亡的影响.方法 用不同剂量的谷氨酸抑制剂受体非诺班作用于骨肉瘤细胞系LM7,采用细胞免疫荧光染色实验及细胞集落形成实验观察不同浓度的药物对骨肉瘤细胞增殖情况的影响,采用细胞TUNNL染色实验观察骨肉瘤细胞系在不同药物浓度下的凋亡情况.Western blot法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况.结果 对照组细胞活性为(99.8±0.2)%,100 μmol/L非诺班治疗组细胞活性为对照组的(98.3±3.4)%,200 μmol/L组细胞活性为对照组的(68.6±5.6)%,300 μmol/L组细胞活性为对照组的(46.4±3.5)%.随着非诺班浓度的增加,Ki-67荧光染色阳性的细胞数减少,对照组及100、200、300 μmol/L组依次为(2750±32)、(2720±45)、(1280±47)、(695±50)个;LM7细胞形成的集落数相应减少;同时TUNEL荧光染色阳性的细胞数逐渐增加,对照组及100、200、300 μmol/L组分别为(14±5)、(23±6)、(2653±274)、(3152±179)个.Western blot结果显示非诺班抑制PI3K及AKT蛋白的磷酸化.结论 特异性谷氨酸受体拮抗药非诺班能有效抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进其凋亡,该过程与抑制PI3K/AKT信号通路有关,为临床治疗骨肉瘤提供可能的线索.
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EPHA2-siRNA质粒对骨肉瘤细胞生物学行为的影响
目的 探讨骨肉瘤细胞中EPHA2基因表达对细胞增殖、凋亡以及仿血管发生的影响.方法 应用pSiliencer质粒构建靶向EPHA2的siRNA质粒;脂质体转染siRNA质粒入骨肉瘤细胞,Western blot在蛋白水平检测转染前后细胞基因表达情况;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪结合Annexin V-FITC和PI染色以及HE染色观察转染前后骨肉瘤细胞增殖、凋亡及仿血管发生情况.结果 成功构建了针对EPHA2的siRNA表达质粒;将质粒转染入骨肉瘤后,EPHA2基因在蛋白表达水平下调;骨肉瘤细胞增殖能力下降,并发生了早期凋亡,骨肉瘤细胞的仿血管发生受到抑制.结论 EPHA2参与了骨肉瘤细胞增殖、早期凋亡和仿血管发生;利用RNA干扰技术靶向EPHA2基因治疗可能为骨肉瘤治疗提供新方法.
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回转器模拟失重对ROS17/2.8细胞分化基因表达的作用
目的观察回转器模拟失重对ROS17/2.8(大鼠骨肉瘤)细胞分化相关基因表达的影响.方法对培养的ROS17/2.8细胞采用回转器模拟失重24、48及72 h,并设1 G对照组.提取细胞总RNA,进行反转录PCR,检测I型胶原α1链和碱性磷酸酶mRNA的表达量,计算与内参照物β-actin的比值.结果模拟失重72 h后,失重组细胞内COL-I α1及alkline phosphatase(ALP)的基因表达量明显低于对照组(P<0.01).结论回转器模拟失重72 h使大鼠骨肉瘤细胞的分化功能降低.
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流体剪切应力对人骨肉瘤成骨样MG-63细胞Cbfα1基因表达的影响
目的观察流体剪切应力(FSS)对人骨肉瘤成骨样细胞(MG-63)Cbfα1基因表达的影响.方法对MG-63骨肉瘤细胞进行培养,传代60 h后,将细胞置于流室系统中进行应力刺激实验.FSS分为0.5 Pa和1.5 Pa两个水平,每个水平下作用时间分别为15 min、30 min和60 min.提取细胞总RNA,进行反转录PCR,检测细胞内Cbfα1 mRNA的表达,并计算与内参照GAPDH mRNA的比值.结果与对照组相比,FSS 作用组的Cbfα1 mRNA的表达在30 min和60 min均显著增强,且在一定的时间范围内(15～60 min),Cbfα1 mRNA的表达水平随着作用时间的延长、应力水平的增加而增强,在30 min和60 min的变化具有显著性意义(P<0.01).结论 FSS可以促进成骨细胞内Cbfα1的表达.
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模拟失重对大鼠骨肉瘤细胞内Ⅰ型胶原表达的影响
目的通过观察回转条件下培养的大鼠骨肉瘤细胞内Ⅰ型胶原的基因和蛋白表达的变化,探讨模拟失重对成骨细胞增殖功能的影响. 方法对培养的大鼠骨肉瘤细胞采用回转器模拟失重24、48、72 h,同时设1 G对照组.在各时间点提取细胞总RNA,进行反转录PCR,检测Ⅰ型胶原α1链(COL-Iα1)mRNA的表达情况,同时采用ELISA法测定细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达量. 结果模拟失重72 h细胞内COL-Iα1 mRNA和Ⅰ型胶原蛋白的表达量均明显低于对照组. 结论回转器模拟失重72 h使大鼠骨肉瘤细胞的增殖功能降低.
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模拟失重条件下骨形态发生蛋白-2诱导的成骨细胞蛋白激酶MEK1活性的变化
目的观察模拟失重条件下由骨形态发生蛋白-2(BMP-2)诱导的大鼠骨肉瘤成骨样细胞(ROS17/2.8)中丝裂原激活的蛋白激酶/细胞外信号调节激酶的激酶1(MAPK/ERK kinase 1,MEK1)活性的变化. 方法在地面1 G和回转器模拟失重条件下培养ROS17/2.8细胞,培养时间分别为24 h、48 h和72 h.培养结束前1 h加入BMP-2(500 ng/ml),1 h后提取细胞蛋白,应用Western Blotting法检测细胞中的总细胞外信号调节激酶1/2(总ERK1/2)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)的含量.另设一空白对照组,即1 G条件下不加BMP-2的培养组. 结果 7个实验组细胞的总ERK1/2蛋白表达量无明显差异;空白对照组p-ERK1/2的表达量极低,明显低于其他6组(P<0.01);各时间点模拟失重组p-ERK1/2表达量均低于1 G对照组(P<0.01);随着失重时间延长p-ERK1/2表达量呈逐渐降低的趋势(P<0.01). 结论模拟失重条件下BMP-2诱导的成骨细胞MAPK信号通路中蛋白激酶MEK1的活性下降.
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顺铂诱导自噬和丝裂原活化蛋白激酶调控骨肉瘤细胞耐药的机制研究
目的 探讨自噬和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在骨肉瘤细胞顺铂化疗后耐药性获得过程中所发挥的功能.方法 通过细胞克隆分析实验检测不同顺铂浓度下的细胞存活情况以确定佳处理浓度及耐药细胞株,Western Blot检测自噬和MAPK等相关蛋白表达含量变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测自噬相关基因转录水平变化,AnnexinV-FITC及Z-VAD-FMK检测细胞凋亡情况,利用药物抑制自噬和MAPK信号通路探讨两者对骨肉瘤细胞耐药性获得的贡献.结果 细胞克隆分析实验结果显示,7.5μmol/L顺铂浓度诱导显著的细胞凋亡,通过连续10 d的药物筛选获得耐药细胞株,且在显微镜下观察到骨肉瘤细胞获得耐药性后细胞形态发生变化,同时DNA损伤修复的关键因子PARP蛋白表达上调明显;RT-PCR及Western Blot结果显示顺铂激活了骨肉瘤细胞中的自噬过程,ATG5和LC3B-Ⅱ蛋白及mRNA水平均上调(P<0.05),同时AnnexinV-FITC及Z-VAD-FMK实验结果显示当抑制了自噬后细胞凋亡显著增加(P<0.05),骨肉瘤细胞恢复了对顺铂的敏感性,且此过程有MAPK信号的参与.结论 自噬和MAPK信号在骨肉瘤细胞顺铂耐药过程中发挥重要作用,这一结果可对改善骨肉瘤患者的治疗策略提供新思路.
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小窝蛋白-1对血管内皮生长因子孵育的骨肉瘤细胞血管内皮生长因子受体-2表达水平的影响
目的:研究小窝蛋白-1(caveolin-1)对血管内皮生长因子(VEGF)孵育的骨肉瘤细胞株(SOSP-9607)血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)表达的影响,探讨其在骨肉瘤发展中作用的可能机制.方法:实验分为三组,即对照组、VEGF组、VEGF+caveolin-1 小片段干扰核糖核酸(siRNA)组.反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测VEGF孵育的SOSP-9607细胞中caveolin-1、VEGFR-2信使核糖核酸 (mRNA)的表达;蛋白质印迹(Western Blot)检测caveolin-1、VEGFR-2蛋白的表达.结果:与对照组相比,VEGF组细胞caveolin-1、VEGFR-2 mRNA和蛋白表达明显增加(均P<0.01),VEGF+caveolin-1 siRNA组细胞caveolin-1 mRNA和蛋白表达减少,而VEGFR-2 mRNA表达增加,蛋白水平却表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:caveolin-1能明显减少VEGF刺激下的骨肉瘤细胞中的VEGFR-2蛋白水平的表达,提示caveolin-1在VEGF依赖性信号级联反应中起正调控作用,为临床选择合适的靶点治疗骨肉瘤的血管生成提供实验依据.
关键词： Caveolin-1 骨肉瘤细胞 VEGF 正调控 -
依托泊苷联合顺铂对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨依托泊苷联合顺铂对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,为骨肉瘤的治疗找寻新的化疗方法.方法采用MTT法检测药物对骨肉瘤细胞增殖的影响.倒置相差显微镜来观察用药前后细胞形态改变,用流式细胞仪检测药物分别及联合作用骨肉瘤细胞后细胞凋亡情况.结果 依托泊苷联合顺铂能明显抑制骨肉瘤细胞的生长,与两药单独使用相比较,联合用药抑制骨肉瘤细胞增殖的作用明显增强.依托泊苷联合顺铂作用于骨肉瘤细胞后凋亡率增高.倒置相差显微镜可见两药联用时大量骨肉瘤细胞凋亡脱落.结论 依托泊苷联合顺铂能有效抑制骨肉瘤细胞增殖,且促进骨肉瘤细胞凋亡,具有协同抗肿瘤作用.
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外周血淋巴细胞和骨肉瘤细胞体外化疗药敏相关性研究
目的:研究外周血淋巴细胞和骨肉瘤细胞体外化疗药敏的相关性.方法:采用MTT法体外药敏试验检测30例骨肉瘤患者外周血淋巴细胞和其肿瘤细胞对14种化疗药物的敏感性.结果:经统计学处理,骨肉瘤患者外周血淋巴细胞与其肿瘤细胞的体外药敏试验对14种化疗药物的敏感性差异无显著性(P＞0.05).两种细胞药敏试验对CBP、DDP、EADM、MTX、THP、VM26中度敏感;对ADM、BLM、MMC、VCR低度敏感;对HCPT、DTIC、Vp-16不敏感.结论:骨肉瘤患者外周血淋巴细胞与其肿瘤细胞对化疗药物的敏感性具有良好的正相关性,外周血淋巴细胞化疗药敏检测对临床选择化疗药物具有重要的参考价值.
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缺氧对HRE-TK/GCV系统杀伤骨肉瘤细胞的增强作用
目的:探讨缺氧条件下,缺氧反应元件启动子-胸苷激酶/丙氧鸟苷(HRE-TK/GCV)系统对骨肉瘤细胞系MG63靶向性杀伤作用.方法:构建由HRE启动子驱动的含潮霉素磷酸转移酶-单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(Hygromycin phosphotransferase-thymidine kinase,HyTK)融合基因的真核表达质粒pBI-HRE-HyTK,并将其转染入骨肉瘤细胞系MG63.应用PCR和RT-PCR方法检测TK基因的整合及表达;用MTT法和混合共培养实验分别检测转基因细胞在缺氧或不缺氧状态下对GCV的敏感性以及HRE-TK/GCV系统的"旁观者效应";流式细胞仪检测细胞周期改变及电镜观察细胞超微结构变化探讨其作用机制.结果:成功构建了真核表达质粒pBI-HRE-HyTK,得到转基因细胞系MG63TK.检测到MG63TK细胞内TK基因的DNA和mRNA.MG63TK细胞在不缺氧状态下对GCV不敏感,当GCV浓度达50μg/ml时,仅30%左右细胞被杀死;而缺氧状态下,GCV浓度1μg/ml时,50%左右细胞被杀死,GCV浓度50μg/ml时,90%以上细胞被杀死.混合共培养实验中,缺氧状态下,HRE-TK/GCV系统旁观者效应明显增强,MG63细胞存活率显著低于不缺氧状态下.缺氧和GCV共同作用使转基因细胞DNA合成抑制,细胞周期阻滞于G0G1期,细胞发生凋亡和坏死.结论:缺氧可以增强HRE-TK/GCV系统对体外培养骨肉瘤细胞系选择性的杀伤作用和旁观者效应,该系统为骨肉瘤靶向性基因治疗提供了新的有效途径.
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鬼臼毒素衍生物ZM对人骨肉瘤细胞HOS增殖及PCNA基因表达的影响
[目的]研究鬼臼毒素衍生物ZM对HOS细胞增殖及PCNA表达影响.[方法]培养HOS细胞,实验随机分为正常对照组、鬼臼毒素衍生物ZM组和阳性对照组.用MTT法检测鬼臼毒素衍生物ZM对HOS细胞的生长抑制作用,DNA Ladder凝胶电泳法分析鬼臼毒素衍生物ZM的诱导凋亡作用,RT-PCR检测PCNA基因的表达.[结果]与正常对照组相比,鬼臼毒素衍生物ZM能明显抑制HOS细胞的生长,且与浓度、时间呈依赖性,其IC50(48 h)为(1.32±0.3)μmol/L；鬼臼毒素衍生物ZM处理HOS细胞后,DNA凝胶电泳结果显示呈明显的梯状条带,RT-PCR结果显示PCNA表达显著下调.[结论]鬼臼毒素衍生物ZM对人骨肉瘤细胞HOS有明显的生长抑制作用,该作用可能与诱导凋亡和PCNA基因的表达下调有关.
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顺铂联合卡铂对骨肉瘤细胞毒作用的实验研究
目的:通过半量顺铂和卡铂联合与单一顺铂或卡铂对骨肉瘤细胞株(OS-732)的细胞毒性的对比研究,为顺铂联合卡铂治疗骨肉瘤提供实验依据.方法:用IC50的顺铂、IC50的卡铂、1/2IC50的顺铂+1/2IC50的卡铂与骨肉瘤细胞株(OS-732)的作用48、72h后计算各组的细胞毒性指数值(CI).结果:IC50的顺铂、IC50的卡铂、1/2IC50的卡铂与骨肉瘤细胞株(OS-732)的作用48h后CI值分别为55.8%、57.4%、58.1%,三组比较无统计学意义(P＞0.05);IC50的顺铂、IC50的卡铂、1/2IC50的顺铂+卡1/2IC50的卡铂与骨肉瘤细胞株(OS-732)作用72h后CI值分别为64.4%、69.8%、68.5%,IC50的顺铂组与1/2IC50的顺铂+1/2IC50的卡铂组和IC50的卡铂组比较均有统计学意义(P＜0.05).IC50的卡铂组与1/2IC50的顺铂+1/2IC50的卡铂组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:半量顺铂、卡铂联合能产生与单独顺铂或卡铂对骨肉瘤细胞株(OS-732)相似的细胞毒性作用.
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番茄红素对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制研究
目的 观察番茄红素对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制.方法 取处于对数生长期人骨肉瘤MG-63细胞,设空白组,番茄红素低、中、高剂量组(5,10,20 μg/mL)和顺铂(40 μg/mL)组.各组给予相应干预48 h后,观察细胞生长情况, MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期、细胞凋亡情况并计算凋亡率,逆转录PCR(RT-PCR)法检测凋亡相关基因Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达并计算Bax/Bcl-2值,免疫蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3表达情况.结果 光学显微镜下观察可见空白组人骨肉瘤MG-63细胞呈贴壁生长,增殖迅速,而番茄红素各组和顺铂组细胞增殖受到抑制,细胞数明显减少,呈现回缩、脱落现象.番茄红素各组和顺铂组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达量均明显高于空白组(P均<0.05),且番茄红素高剂量组均明显高于顺铂组(P均<0.05).番茄红素中、高剂量组G0/G1期细胞所占比例、Bax mRNA表达量、Bax/Bcl-2值均明显高于空白组(P均<0.05),Bcl-2 mRNA表达量均明显低于空白组(P均<0.05),且除Bax mRNA表达量外,番茄红素高剂量组各指标改善情况均明显优于顺铂组(P均<0.05).结论 番茄红素具有抑制人骨肉瘤细胞增殖并促进其凋亡的作用,机制可能与阻滞细胞周期和影响凋亡调控基因、蛋白表达有关.
关键词： 番茄红素 骨肉瘤细胞 增殖 凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3
