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miR-34a-5p对胃腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制
目的 探讨miR-34a-5p对胃腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 ①采用生物信息学技术预测Bcl-2是否为miR-34a-5p的靶基因.②体外培养人正常胃黏膜上皮细胞RGM-1、人胃腺癌细胞SGC7901,采用qRT-PCR法检测两种细胞miR-34a-5p、Bcl-2 mRNA表达.③将SGC7901细胞随机分为观察组和对照组,观察组转染miR-34a-5p mimic质粒,对照组转染scramble质粒.转染48 h,采用qRT-PCR法、Western blotting法检测Bcl-2 mRNA和蛋白表达.④将SGC7901细胞随机分为阴性对照组、Bcl-2 WT组、Bcl-2 MT组,阴性对照组转染miR-34a-5p mimic和pRL-TK,Bcl-2 WT组转染miR-34a-5p mimic、Bcl-2野生型载体和pRL-TK,Bcl-2 MT组转染miR-34a-5p mimic、Bcl-2突变型载体和pRL-TK.转染48h,采用双荧光素酶报告基因实验检测各组相对荧光素酶活性.⑤将SGC7901细胞随机分为阴性对照组、miR-34a-5p mimic组、pcDNA3.1-Bcl-2组、miR-34a-5p mimic+ pcDNA3.1-Bcl-2组,阴性对照组转染scramble+ pcDNA3.1-空载体,miR-34a-5p mimic组转染miR-34a-5p mimic,pcDNA3.1-Bcl-2组转染pcDNA3.1-Bcl-2,miR-34a-5p mimic+ pcDNA3.1-Bcl-2组转染miR-34a-5p mimic+ pcDNA3.1-Bcl-2.转染48 h,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果 ①Bcl-2为miR-34a-5p的靶基因.②SGC7901细胞miR-34a-5p mRNA相对表达量低于RGM-1细胞(P＜0.01),Bcl-2 mRNA相对表达量高于RGM-1细胞(P＜0.01).③观察组Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组(P均＜0.01).④Bcl-2 WT组相对荧光素酶活性低于阴性对照组和Bcl-2 MT组(P均＜0.01).⑤miR-34a-5p mimic组细胞凋亡率高于阴性对照组,pcDNA3.1-Bcl-2组、miR-34a-5p mimic+ pcDNA3.1-Bcl-2组低于阴性对照组及miR-34a-5p mimic组,组间比较P均＜0.01.结论 miR-34a-5p可通过靶向调控Bcl-2抑制胃腺癌细胞凋亡,进而参与胃腺癌的发生、发展.
关键词： 胃癌 微小RNA-34a-5p B细胞淋巴瘤2 细胞凋亡
