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海藻多糖对H2O2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5氧化损伤的影响及其机制
目的 探讨海藻多糖对H2O2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5氧化损伤的影响及机制.方法 将体外培养的人胚肺成纤维细胞MRC-5随机分为空白组、H2O2组、海藻多糖组、海藻多糖+H2O2组、H2O2+海藻多糖组.空白组正常培养,H2O2组给予H2O2处理,海藻多糖组给予海藻多糖处理,海藻多糖+H2O2组先给予海藻多糖干预1 h、再给予H2O2处理,H2O2+海藻多糖组先给予H2O2干预1 h、再给予海藻多糖处理.各组H2O2浓度均为600 μmol/L,海藻多糖浓度均为0.312 5 mg/mL.各组均于干预0、24、48、72 h时采用MTT法检测细胞增殖抑制率;处理24 h时检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)表达,采用免疫荧光法检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达,采用RT-PCR法检测Nrf2、Kelch样ECH联合蛋白1(Keap1)、NADP(H)醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素氧合酶1(HO-1)、CGLC mRNA表达.结果 培养24、48、72 h时,H2O2组、海藻多糖+H2O2组、H2O2+海藻多糖组细胞增殖抑制率均高于空白组及海藻多糖组,海藻多糖+H2O2组、H2O2+海藻多糖组均低于H2O2组,组间比较P均<0.05.与空白组及海藻多糖组比较,H2O2组、海藻多糖+H2O2组、H2O2+海藻多糖组MDA、ROS表达增加,SOD表达降低;与H2O2组比较,海藻多糖+H2O2组、H2O2+海藻多糖组MDA、ROS表达降低,SOD表达增加,组间比较P均<0.05.与空白组及海藻多糖组比较,H2O2组、海藻多糖+H2O2组、H2O2+海藻多糖组Nrf2 mRNA和蛋白相对表达量均降低,海藻多糖+H2O2组、H2O2+海藻多糖组均较H2O2组升高,组间比较P均<0.05.与空白组及海藻多糖组比较,H2O2组、海藻多糖+H2O2组、H2O2+海藻多糖组Keap1 mRNA相对表达量均升高,NQO1、CGLC、HO-1 mRNA相对表达量均降低;与H2O2组比较,海藻多糖+H2O2组、H2O2+海藻多糖组Keap1 mRNA相对表达量均降低,NQO1、CGLC、HO-1 mRNA相对表达量均升高;组间比较P均<0.05.结论 海藻多糖可抑制H2O2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5的氧化应激损伤,上调 Nrf2表达、激活Nrf2/Keap1/抗氧化反应序列元件信号通路可能是其作用机制.
