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血清载脂蛋白B椭偏光蛋白质芯片技术定量检测的条件优化
目的：优化椭偏光蛋白芯片技术定量检测血清载脂蛋白B（ApoB）的条件，并观察佳条件下椭偏光蛋白芯片技术定量检测血清ApoB的准确性。方法用椭偏光蛋白芯片技术检测含有0．2、0．3、0．4、0．5、0．6 mg／mL的载脂蛋白B抗体（anti ApoB）和200μg／mL ApoB标准品的溶液，测得灰度值高者选为佳anti-ApoB浓度。用椭偏光蛋白芯片技术检测5、10、20、50、100、200μg／mL ApoB标准品溶液，anti- ApoB浓度为0．3 mg／mL，结果以灰度值表示。然后在上述标准品溶液中加入蛋白G使其终浓度为0．1 mg／mL，再检测一次灰度值。比较两次检测的灰度值，确定是否应该加入0．1 mg／mL蛋白G。佳条件下椭偏光蛋白芯片技术检测0、5、10、20、50、100、200μg／mL ApoB标准品溶液，计算上述ApoB标准品溶液灰度值与不含ApoB的空白探针溶液（含anti ApoB和蛋白G）灰度值的差值。对上述ApoB标准品溶液浓度和灰度值差值的相关性进行分析，以ApoB标准品溶液浓度为横坐标，灰度值差值为纵坐标描画标准曲线并建立方程。佳条件下用椭偏光蛋白芯片技术检测16份40倍稀释的已知ApoB浓度（采用免疫比浊法测定）血清的灰度值两次。用上述方程计算16份血清中ApoB浓度，并与其实际ApoB浓度比较。结果佳anti-ApoB浓度为0．3 mg／mL。与不应用蛋白G者相比，应用0．1 mg／mL蛋白G的椭偏光蛋白芯片技术测得样品的灰度值高（P均＜0．05）。以ApoB浓度为横坐标x、灰度差值为纵坐标y描画标准曲线， Maple9．5软件得出的回归方程为：y＝－23．116Ln（1－x／60），R2＝0．9364。16份血清ApoB浓度和第一次、第二次用椭偏光蛋白芯片技术检测测得血清ApoB浓度相比P均＞0．05。结论椭偏光蛋白芯片技术检测血清ApoB的佳条件为anti-ApoB浓度0．3 mg／mL，蛋白G浓度0．1 mg／mL。此条件下椭偏光蛋白芯片技术检测血清ApoB结果准确。
