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慢病毒载体质粒文献资料
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人SNCG基因shRNA慢病毒载体质粒的构建及鉴定
目的：构建人SNCG基因短发夹干扰RNA（shRNA）慢病毒载体质粒，并观察用其转染后人子宫内膜癌HEC-1-A 和 Ishikawa 细胞 SNCG mRNA 和蛋白的表达变化。方法设计3种 SNCG 基因特异性 shRNA 序列 SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3，用脂质体 Lipofectamine 2000在293T 细胞构建成慢病毒载体质粒。用 SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3慢病毒载体质粒转染人子宫内膜癌 HEC-1-A 和 Ishikawa 细胞，用实时荧光定量 PCR 法检测SNCG mRNA，用 Western blot 法检测 SNCG 蛋白。结果利用 Age Ⅰ和 EcoR Ⅰ双酶切连接转化后的3组阳性转化子，1％琼脂糖凝胶电泳，特异条带与预计结果相符。Chromas Lite 比对分析基因测序结果，鉴定结果与 GenBank 数据库一致，表明合成的3对 SNCG shRNA 序列 SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3插入正确。HEC-1-A 和 Ishikawa细胞转染 SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3慢病毒载体质粒后 SNCG mRNA 和蛋白的表达均显著降低（P 均＜0．05）。结论成功构建了3种 SNCG shRNA 慢病毒载体质粒，用其转染 HEC-1-A 和 Ishikawa 细胞后可有效沉默SNCG 基因表达。
