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荧光定量RT - PCR文献资料
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柯萨奇病毒B3的TaqMan实时荧光定量RT - PCR检测方法的建立
目的:建立一种检测柯萨奇病毒B3( Coxsackievirus B3)的实时荧光定量RT - PCR方法,为临床CVB3的快速、准确检测提供一种新的方法.方法:针对CVB3基因的VP4区和管家基因β- actin的核苷酸序列分别设计了特异性的引物和TaqMan荧光探针,以重组质粒pMD18 -T - CVB3为标准品,进行实时荧光定量RT - PCR检测,并构建CVB3的荧光定量RT-PCR标准曲线.结果:建立的方法在1.0×101 ～ 1.0×108 copies/μl模板范围内具有良好的线性关系(r2＞0.999),扩增效率高于98.0％,至少可检测10 copies/μl的阳性标准品.用CVB3感染HeLa细胞来模拟实际样品,灵敏度可达到1.0×101 copies.结论:建立的荧光定量RT- PCR具有较高的敏感性、特异性和重复性,可作为CVB3的快速诊断方法,为CVB3感染的临床治疗提供快速可靠的诊断依据.
