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波斯特消毒剂杀菌效果及毒性研究
波斯特(Polysept)消毒剂又称保力莎,由德国引进,其有效成分为聚氧烯烃基胍(聚六亚甲基胍)的衍生物,分子式为(c7H14O2N3Cl)n,我们在实验室对其杀菌效果、影响因素和毒性进行了研究,现报告如下:
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普罗布考对甲基胍诱导纤维化相关因子在HK-2细胞表达的影响
目的 研究降脂药普罗布考对小分子尿毒素甲基胍诱导纤维化相关因子在人肾小管上皮细胞表达的影响.方法 HK-2细胞分3组培养,A组(正常对照,不加干预因素);B组培养基中加入0.5 mmol·L-1甲基胍;C组培养基中加入0.5mmol·L-1甲基胍和20μmol·L-1普罗布考.各组细胞培养48 h后用免疫细胞化学、RT-PCR检测TGF-β1、CTGF和FN,并用流式细胞仪时以上因子作定量检测,以观察其在HK-2细胞中的表达.结果 在甲基胍刺激后,细胞免疫化学染色,HK-2细胞质中着色,显示TGF-β1、CTGF和FN均有表达.正常对照组HK-2细胞质中无着色.测定结果显示甲基胍组TGF-β1、CTGF和FN显著高于正常对照组(P<0.01),加入普罗布考后,表达显著下降(P<0.01).结论 甲基胍能促进纤维化相关因子在肾小管上皮细胞中表达;普罗布考能抑制甲基胍诱导纤维化相关因子在肾小管上皮细胞的表达.
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抗氧化剂对甲基胍所致肾小管上皮细胞凋亡的保护作用
目的 研究甲基胍对人肾小管上皮细胞凋亡的影响,以及前列腺素E1(PGE1)和普罗布考的抗凋亡作用.方法 HK-2细胞分5组培养,A正常对照组;B肌酐组:培养基中加入0.5 mmol·L-1肌酐;C甲基胍组:培养基中加入0.5 mmol·L-1甲基胍;D PGE1组:培养基中加入0.5 mmol·L-1甲基胍和2 μg·L-1 PGE1;E普罗布考组:培养基中加入0.5 mmol·L-1甲基胍和20 μmol·L-1普罗布考.培养48 h后用MTT比色法测OD值,并检测培养液NAG酶(N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶)活性;用Hoechst染色及Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 ①肌酐组和甲基胍组HK-2细胞OD值较正常对照组显著下降(P＜0.01),NAG酶活性上升(P＜0.01);甲基胍组与肌酐组比较,OD值和酶活性有显著性差异(P＜0.01);PGE1组和普罗布考组与甲基胍组和肌酐组比较,OD值显著上升而NAG酶活性下降,PGE1改变幅度大于普罗布考组(P＜0.01).②HK-2细胞加入甲基胍后,Hoechst33258 染色显示凋亡细胞呈现核固缩,染色加深,并出现凋亡小体.③流式细胞显示甲基胍组HK-2细胞凋亡率显著高于对照组和肌酐组(P＜0.01).PGE1和普罗布考组的凋亡率显著下降(P＜0.01),PGE1组下降幅度大于普罗布考组(P＜0.05).结论 肌酐、甲基胍有促进肾小管上皮细胞凋亡的作用,后者较前者明显 .PGE1、普罗布考对甲基胍所致肾小管上皮细胞凋亡有一定的保护作用.
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普罗布考对甲基胍加重残余肾功能损害的干预研究
目的 观察甲基胍加重肾衰大鼠残余肾功能损害,以及普罗布考的干预作用.方法 大鼠随机分为假手术组A(正常对照)和5/6肾切除肾衰模型(B、C、D),B组:给予生理盐水灌胃.C组:给予甲基胍.D组:甲基胍+普罗布考组,检测各组血清尿素氮、肌酐,观察肾脏组织的病理改变,免疫组化法检测肾组织内转化生长因子(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维结合蛋白(FN)的表达水平,TUNEL观察细胞的凋亡.结果 模型组(B、C、D)较A组血清尿素氮、肌酐显著升高(F =93.355,192.336,P＜0.05),肾小球体积增大、系膜细胞及基质明显增生,免疫组化染色显示阳性面积TGF-β1、CTGF、FN表达显著增强(F =2064.459,814.527,91.021,P＜0.05),细胞凋亡率显著增加(F=118.97,P＜0.05).加入甲基胍后血清尿素氮、肌酐较模型组明显升高(F =93.355,192.336,P＜0.05),肾小球体积较模型组明显增大、系膜细胞及基质较模型组增生严重,免疫组化染色显示TGF-β1、CTGF、FN均较模型组表达增强(F=2064.459,814.527,91.021,P＜0.05),细胞凋亡率较模型组显著增加(F=2064.459,814.527,91.021,P＜0.05),而加入普罗布考后血清尿素氮、肌酐明显下降(F=93.355,192.336,P＜0.05),肾小球体积小于甲基胍组、系膜细胞及基质增生小于甲基胍组,免疫组化显示TGF-β1、CTGT、FN表达减弱(F =2064.459,814.527,91.021,P＜0.05),细胞凋亡率显著降低(F =118.97,P＜0.05).结论 甲基胍可促进肾衰大鼠残余肾细胞的凋亡和纤维化相关因子的表达,普罗布考有一定的拮抗作用.
