首页 > 文献资料
-
霍乱弧菌毒素协同调节菌毛基因tcpA的克隆及序列分析
目的 以新疆分离0139霍乱弧菌XJ93006株的DNA为模板,自行设计引物克隆毒素协同调节菌毛亚单位A(tcpA)基因(包括侧序列)并构建重组载体.方法以0139霍乱弧菌新疆分离株XJ93006基因组DNA作为模板;根据Ol群E1Tor型霍乱弧菌N16961全基因组序列设计tcpA PCR引物,高保真酶扩增tcpA片段:限制性内切酶切PCR产物和pNEBl93空质粒,T4DNA连接酶连接酶切产物,重组质粒转化大肠杆菌TB1工程菌,蓝白斑菌落试验筛选阳性克隆;提取质粒经酶切鉴定后测序并利用生物信息数据库对该序列进行序列分析,比较.结果DNA限制性内切酶可从重组质粒pNEBl93-tcpA的EcoRⅠ和SalⅠ位点之间切出一个1037bp的DNA片段,测序结果与O1群E1Tor型霍乱弧菌N16961、O139霍乱弧菌标准株M045的tcpA同源性均达到99.9%以上.结论成功构建O139霍乱弧菌新疆分离株XJ93006毒素协同调节菌毛亚单位A(tcpA)基因的重组质粒pNEBl93-tcpA;序列分析表明霍乱弧菌毒素协同调节菌毛亚单位A(tcpA)基因在O1群EITor型霍乱弧菌和O139霍乱弧菌中是一类高度保守的原核基因,可作为霍乱弧菌疫苗的候选基因.另外为研究O139霍乱弧菌的来源奠定基础.
-
霍乱弧菌O139和El Tor菌株tcpA分子特征的研究
[目的]从霍乱弧菌XJ93006、MO45、XJ89079中克隆毒素协同调节菌毛亚单位A(tcpA)基因(包括侧序列)并测序比较.[方法]PCR扩增tcpA片段;克隆该片段;提取质粒经鉴定后测序并利用DNAMAN对该序列进行序列分析,比较.[结果]成功构建XJ93006、MO45、XJ89079 tcpA基因的重组质粒.三株霍乱弧菌及与N16961tcpA基因及其两侧核酸序列同源性XJ89079和N16961为100%,XJ93006和XJ89079为99.8%,XJ93006和MO45为99.5%,XJ89079和MO45为99.7%.[结论]该研究初步认为我国新疆VC O139与本地EVC关系密切.
