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过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂抑制血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达
目的 探讨氧化应激对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响,观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂对Ang Ⅱ诱导的MCP-1表达的抑制作用.方法 体外培养人肾小球系膜细胞.分为正常对照组、不同水平AngⅡ(1、10、100 nmol/L)刺激组及乙酰半胱氨酸(NAC,10 μmol/L)和罗格列酮(10 μmol/L)预处理30 min后加入AngⅡ(100 nmol/L)刺激组.应用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测各组MCP-1的表达,荧光探针2',7'-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFDA)检测细胞内活性氧的变化.结果 1.AngⅡ呈剂量依赖性的诱导肾小球系膜细胞MCP-1表达,1.10和100 nmol/L Ang Ⅱ刺激12 h后MCP-1表达是对照组的1.80、2.51和3.57倍.2.Ang Ⅱ可呈剂量依赖性诱导肾小球系膜细胞活性氧(ROS)的产生,1、10和100 nmol/L AngⅡ刺激60 min,ROS产生分别是对照组的1.82、2.92和4.08倍.3.Losartan完全阻断了Ang Ⅱ诱导的ROS产生,而PD123319对Ang Ⅱ诱导的ROS产生无抑制作用.4.抗氧化剂NAC显著抑制Ang Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞MCP-1表达.5.PPARγ受体激动剂罗格列酮10 μmol/L可显著抑制AngⅡ诱导的系膜细胞ROS产生和MCP-1表达.结论 Ang Ⅱ通过诱导氧化应激促进肾小球系膜细胞MCP-1表达;PPARγ激动剂通过抑制氧化应激阻断Ang Ⅱ诱导的MCP-1表达.
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过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂对肾病大鼠肾组织nephrin表达的调控
目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)对nephrin表达的调控作用.方法 建立大鼠氨基核苷嘌呤霉素 (PAN)肾病模型,应用实时定量PCR和免疫印迹法检测肾病大鼠不同时间点肾组织中PPARγ和nephrin mRNA和蛋白表达,并观察PPAR-γ激动剂罗格列酮大鼠肾组织中nephrin表达的影响.体外培养HEK293细胞,转染含荧光素酶报告基因的nephrin启动子区,观察罗格列酮对nephrin基因转录活性的影响.结果 PAN肾病模型d1 PPARγ、nephrin mRNA和蛋白即出现下降,d3出现明显下降,d7下降到低点,PPARγ与nephrin表达呈显著正相关,而PPARγ和nephrin蛋白表达与24 h尿蛋白排泄呈负相关;罗格列酮治疗后大鼠尿蛋白排泄明显下降,肾组织中nephrin表达回升;罗格列酮呈时间依赖性诱导nephrin基因的转录活性,3 h达高峰,其后荧光素酶活性有所下降,但刺激24 h仍显著高于对照组.结论 nephrin表达受PPARγ调控,PPARγ激动剂通过诱导nephrin表达而减轻蛋白尿.
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罗格列酮对肝星状细胞基质金属蛋白酶抑制因子1、2基因表达的影响
目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)表达基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、TIMP-2的影响.方法 在培养的HSC株中加入不同浓度的罗格列酮(终质量浓度为5、10、15、20 μmol/L),于24h后收集细胞,利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达水平.结果 TIMP-1 mRNA表达水平在罗格列酮5、10、15、20 μmol/L组分别为1.8087±0.0642、1.3517±0.0485、0.9510±0.0835、0.5653±0.0879;而空白对照组为2.0508±0.1576.TIMP-2 mRNA表达水平在罗格列酮5、10、15、20 l,mol/L组分别为3.1314±0.0717、2.0758±0.0730、1.4718±0.0623、0.8566±0.0744;而空白对照组为3.5784±0.0956.结论 PPARγ特异配体罗格列酮可抑制HSC表达TIMP-1、TIMP-2,并在一定范围内呈剂量依赖性.
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罗格列酮对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的影响
目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)表达Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COLⅢ)的影响.方法 在培养的HSC株中加入不同浓度的罗格列酮(终质量浓度为5、10、15、20 μmol/L),于24 h后收集细胞,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定COL Ⅰ、COLⅢmRNA的表达水平.结果 COLⅠ mRNA表达水平在罗格列酮5、10、15、20 μmol/L组分别为2.9755±0.0853、1.9866±0.0938、1.4935±0.1078、0.9603±0.1365,而空白对照组为3.4802±0.1331.COLⅢmRNA表达水平在罗格列酮5、10、15、20 μmol/L组分别为3.6207±0.0461、2.6150±0.0793、2.0051±0.0830、1.4175±0.0862,空白对照组为4.2714±0.4652.结论 PPARγ特异配体罗格列酮可抑制HSC对COL Ⅰ、COLⅢ的基因表达,并在一定范围内呈剂量依赖性.
关键词： 肝星状细胞 氧化物酶体增殖物活化受体γ 罗格列酮 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 -
罗格列酮对肝星状细胞基质金属蛋白酶-2和-9基因表达的影响
目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)表达基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的影响.方法 在培养的HSC株中加入不同浓度的罗格列酮(终质量浓度为5、10、15、20 μmol/L),于24 h后收取细胞,利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定MMP-2、MMP-9 mRNA表达.结果 MMP-2表达水平在罗格列酮5、10、15、20 μmol/L组分别为0.5708±0.0609、0.8900±0.0823、1.1348±0.1205、1.4490±0.0832,而空白对照组为0.3237±0.0796.MMP-9表达水平在罗格列酮5、10、15、20 μmol/L组分别为0.5487±0.0770、0.7554±0.0510、0.9497±0.0451、1.1088±0.0777,空白对照组为0.3220±0.0592.结论 罗格列酮可增强HSC对MMP-2、MMP-9的表达,并在一定范围内,呈剂量依赖性.
关键词： 肝星状细胞 氧化物酶体增殖物活化受体γ 罗格列酮 基质金属蛋白酶
