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Nehrin在微小病变型肾病大鼠模型中的表达
目的:观察nephrin在大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型(PAN)中的表达变化,探讨其在蛋白尿发生中的作用.方法:通过建立大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型,应用光镜、电镜观察肾脏病理改变,应用免疫组织化学技术和RT-PCR观察nephrin在不同时间点肾病模型大鼠蛋白水平和mRNA水平表达改变情况.结果:①PAN注射后第1天和第3天,大鼠24 h尿蛋白的排泄量较对照组无显著差异;第10天达高峰,较对照组有显著差异(P＜0.01);第20天,尿蛋白排泄量逐渐下降,较对照组仍有显著差异(P＜0.05);②在PAN肾病模型第3和第10天,透射电镜显示足细胞足突融合;③nephrin蛋白和mRNA水平的表达在大鼠PAN肾病模型第1天即出现下降,第3天出现明显下降,第10天下降到低点,第20天,随着蛋白尿的恢复nephrin的表达也逐渐恢复;④肾小球足细胞nephrin表达的变化与肾病模型大鼠24 h尿蛋白定量的变化呈负相关.结论:①nephrin表达的改变与大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型蛋白尿的发生密切相关;②nephrin是判断肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标.
关键词： nephrin 氨基核苷嘌呤霉素肾病 透射电镜 免疫组织化学 RT-PCR -
过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂对肾病大鼠肾组织nephrin表达的调控
目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)对nephrin表达的调控作用.方法 建立大鼠氨基核苷嘌呤霉素 (PAN)肾病模型,应用实时定量PCR和免疫印迹法检测肾病大鼠不同时间点肾组织中PPARγ和nephrin mRNA和蛋白表达,并观察PPAR-γ激动剂罗格列酮大鼠肾组织中nephrin表达的影响.体外培养HEK293细胞,转染含荧光素酶报告基因的nephrin启动子区,观察罗格列酮对nephrin基因转录活性的影响.结果 PAN肾病模型d1 PPARγ、nephrin mRNA和蛋白即出现下降,d3出现明显下降,d7下降到低点,PPARγ与nephrin表达呈显著正相关,而PPARγ和nephrin蛋白表达与24 h尿蛋白排泄呈负相关;罗格列酮治疗后大鼠尿蛋白排泄明显下降,肾组织中nephrin表达回升;罗格列酮呈时间依赖性诱导nephrin基因的转录活性,3 h达高峰,其后荧光素酶活性有所下降,但刺激24 h仍显著高于对照组.结论 nephrin表达受PPARγ调控,PPARγ激动剂通过诱导nephrin表达而减轻蛋白尿.
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巢蛋白在足突广泛融合的肾小球中表达下调及与蛋白尿程度的相关性
目的 观察中间丝蛋白类的巢蛋白(nestin)在足突广泛融合的肾小球中的表达及其与足突病变动态过程和蛋白尿产生的关系.方法 免疫组化法检测nestin在人正常肾组织及微小病变肾组织中的表达.构建氨基核苷嘌呤霉素肾病大鼠模型,应用免疫组化、荧光实时定量PCR、Western印迹法检测注射嘌呤霉素后第1、4、10、20天大鼠肾小球中nestin的分布与表达;电镜观察肾脏足细胞改变,测定尿蛋白量(24 h).分析nestin的变化与蛋白尿的相关性.结果 免疫组化显示nestin在人类微小病变肾小球中的表达较正常组织显著下调(0.93±0.08比1.65±0.12,P<0.05).在嘌呤霉素损伤足细胞早期,肾小球nestin的表达曾有一过性增加(mRNA和蛋白水平分别为对照组的1.23倍和1.48倍,P<0.05),随后持续下降.nestin的mRNA水平在嘌呤霉素注射后第4天时降至对照组的35.8%;第10天时为对照组的12.1%(均P<0.01);病变好转后开始上升,恢复为对照组的65.8%(P<0.05).Western印迹检测nestin蛋白改变也有类似的趋势,嘌呤霉素注射后第4天,nestin蛋白水平有所下降,为对照组的77.0%(P<0.05);至大量蛋白尿的第10天,nestin蛋白水平仅为对照组的58.0%(P<0.05);而随着病变的恢复,嘌呤霉素注射后第20天时nestin蛋白量恢复为对照的83.4%.Pearson相关分析结果显示,注射嘌呤霉素后nestin mRNA(r=-0.667,P<0.05)及蛋白(r=-0.621,P<0.05)表达与尿蛋白量(24 h)均呈负相关.结论 在以足突广泛融合为特征的肾脏病变中,肾小球中间丝蛋白nesfin表达显著减少,并与蛋白尿程度呈负相关,提示nestin可能参与了足细胞形态和功能的维持.
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蛋白尿发病机理研究进展
蛋白尿不仅是肾小球疾病的重要表现之一,而且还是促进肾脏疾病发展的一个重要因素.肾小球性蛋白尿的产生与肾小球的滤过屏障异常密切相关.近年来随着对肾小球滤过屏障结构及功能的深入研究,发现了一种新型的蛋白质Nephrin,它与蛋白尿的产生密切相关.1998瑞典分子生物学家Karl Tryggavason在定位克隆芬兰型的先天性肾病综合征(NPHS1)致病基因时发现了Nephrin,从而开始了对Nephrin的深入研究.Nephrin位于胎儿和成人的肾小球足突裂孔膜上,是组成足突裂孔膜的拉链状结构的重要成分,即是肾小球滤过膜机械屏障的重要组成部分;且Nephrin还含有大量的阴离子,因此还有可能具有电荷屏障的作用.人的Nephrin长约1 241个氨基酸残基,属于免疫球蛋白超家族分子,是一种跨膜蛋白.整个蛋白分子分为胞内区、跨膜区、胞外区.其胞外区伸展于裂孔中,与相对足突上伸出的Nephrin分子发生相互作用,形成裂孔膜之间的孔隙,即电镜下所见的拉链状结构.Nephrin还可以和足突细胞内的CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2-AP)结合,通过CD2-AP将Nephrin与细胞骨架蛋白结合起来,帮助形成和稳定裂孔膜.如Nephrin基因缺陷会导致足突裂孔异常或缺失,从而导致大量蛋白尿和肾功能不全.目前已证实Nephrin即mAb5-1-6抗原;还发现Nephrin不仅与先天性肾病综合征有关,而且在动物模型肾病如氨基核苷嘌呤霉素肾病(PAN)、Heyman肾炎和获得性肾病如微小病变性肾病综合征等.肾病中Nephrin的mRNA表达均明显减少,说明Nephrin的异常与获得性肾病也有密切的关系.Nephrin的发现使人们对蛋白尿的发病机理有了进一步地认识,从而为疾病的治疗提供了新的思路.
