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颅内感染性疾病脑脊液粒细胞单核细胞集落刺激因子的临床意义
目的研究颅内感染性疾病粒细胞单核细胞集落刺激因子的临床价值.方法采用双抗夹心ELISA法测定不同标本GM-CSF含量.结果正常组GM-CSF含量为26.5±42.49 ng/L,<100 ng/L者占90%,其中<10 ng/L者占80%;病毒性脑炎GM-CSF为32.5±40.17 ng/L,其中<100 ng/L者占97.1%,<10 ng/L者占61.8%;细菌性脑膜炎为218.9±134.73 ng/L,其中>100 ng/L者占86.96%.正常组与病毒性脑炎组比较无明显差异(P>0.05);正常组与细菌性脑膜炎组、病毒性脑炎与细菌性脑膜炎组比较有显著差异(P<0.01).判定细菌性脑膜炎以GM-CSF>100 ng/L为标准,其特异性为94.44%,敏感性为86.96%,准确性为93.51%.结论 GM-CSF在抗感染的非特异性细胞免疫中起重要作用,细菌及产物是刺激和调节GM-CSF产生的主要物质,GM-CSF在细菌性脑膜炎中升高明显,可作为临床诊断的一项客观指标.
关键词： 颅内感染 脑脊液 粒细胞单核细胞集落刺激因子 -
GM-CSF治疗异基因造血干细胞移植后残留疾病二例
目的 总结粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后血液系统恶性肿瘤残留疾病两例的经验.方法 例1为骨髓增生异常综合征患者,在非血缘HSCT后半年出现骨髓病态造血和不完全嵌合状态,停用免疫抑制剂3周,未出现移植物抗宿主病(GVHD)；例2为B淋巴细胞急性淋巴细胞白血病患者,移植后30d检测到分子水平的残留疾病.两例均皮下注射GM-CSF 300 μg,隔日1次,应用3周.在此过程中观察患者皮疹情况和肝功能,监测外周血淋巴细胞和髓系衍生抑制性细胞亚群、树突状细胞(DC)的变化.结果 例1应用GM-CSF 1周后出现皮肤Ⅰ度急性GVHD,3周后出现Ⅱ度(皮肤和肝脏)急性GVHD,停用GM-CSF.治疗1个月时骨髓细胞形态学正常,转为完全供者嵌合状态,给予环孢素A(CsA)、吗替麦考酚酯和甲泼尼龙治疗2周而缓解.例2维持CsA(全血浓度为0.134～0.472 μmol/L)治疗,在使用GM-CSF后第9天,出现Ⅰ度急性GVHD,第11天出现Ⅱ度急性GVHD(皮肤),加用泼尼松30 mg/d,共用5d,其后维持Ⅰ度急性GVHD.第30天复查,为分子生物学缓解.2例治疗前后,未发现淋巴细胞亚群变化,但DC有增加趋势,髓系衍生抑制细胞有减少趋势.结论 GMCSF可用于血液系统恶性肿瘤患者HSCT后残留疾病的治疗.
关键词： 造血干细胞移植 肿瘤 残余 粒细胞单核细胞集落刺激因子 治疗 -
GM-CSF基因修饰的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF的构建
目的 构建能分泌表达粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF.方法 将T-h GM-CSF重组质粒转化入感受态大肠杆菌中,筛选出耐药性单克隆菌落送测序.利用PCR技术扩增出GM-CSF目的 基因片段,将PCR产物连入pGEM-T easy载体,转化入大肠杆菌中扩增,用SDS碱裂解法提取Teasy-GM-CSF重组质粒,用限制性内切酶酶切Teasy-GM-CSF重组载体,连入经相同酶酶切的pLXSN反转录病毒载体中.用磷酸钙沉淀法转染PA317包装细胞系进行病毒包装,用含有病毒的上清液感染卵巢癌NuTu-19细胞,经G418加压筛选感染成功的NuTu-19/GM-CSF细胞,用免疫细胞化学和ELISA法检测NuTu-19/GM-CSF分泌表达GM-CSF蛋白的情况.结果 T-h GM-CSF重组质粒测序结果与GenBank Accession#:NM_000758基因序列对比后确定为人类GM-CSF基因编码序列;PCR产物酶切电泳在Mark 400-500bp中有一条带,符合GM-CSF基因序列长度;重组Teasy-GM-CSF质粒用EcoRⅠ、BamHⅠ限制性内切酶酶切后,电泳鉴定在400-500bp之间有一目的 条带,重组反转录病毒质粒pLGM-CSFSN酶切电泳有目的 条带;G418加压筛选感染后的NuTu-19细胞,14d后慢慢形成单克隆继续生长;免疫细胞化学检测到感染成功的NuTu-19细胞膜表面有明显的棕褐色颗粒沉淀,ELISA法检测细胞培养上清液中GM-CSF的质量浓度为150pg/mL.结论 成功构建了能分泌表达人GM-CSF蛋白的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF,为以后研究卵巢癌免疫治疗提供必备、有效、可靠的工具基础.
关键词： NuTu-19细胞 粒细胞单核细胞集落刺激因子 卵巢肿瘤 免疫治疗
