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未成熟新生鼠缺氧缺血损伤后大脑皮质和海马脑源性神经营养因子的变化
目的 观察未成熟新生鼠缺氧缺血(hypoxia-ischemia,HI)损伤后大脑皮质和海马脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的变化,为临床早产儿HI脑损伤提供动物实验依据.方法 3日龄清洁级SD大鼠,分为试验组和对照组.试验组幼鼠分离左侧颈总动脉、结扎离断,缺氧处理;对照组幼鼠分离左侧颈总动脉,不结扎离断也不进行缺氧处理.术后3、7和14 d分别取材进行免疫组织化学染色和Western blot实验.海马层面脑切片进行焦油紫(cresyl fast videt,CV)染色,观察大脑皮质和海马损伤情况,观察模型制作是否成功.进行BDNF免疫组织化学染色,统计大脑皮质和海马单位面积阳性细胞数量.利用Western blot法检测大脑皮质和海马BDNF蛋白相对表达量.结果 CV染色结果:HI损伤后,损伤侧大脑皮质和海马均有不同程度受损,面积减小,证实HI模型制作成功.免疫组织化学染色结果示大脑皮质和海马BDNF阳性细胞变化规律:与损伤对侧和对照组比较,损伤侧阳性细胞数术后3d减少(海马:t=-3.751、-2.920,P均＜0.05;皮质:t=-3.225、-2.298,P均＜0.05),术后7d(海马:t=4.136、2.256,P均＜0.05;皮质:=3.924、2.838,P均＜0.05)、14d(海马:t=3.051、2.719,P均＜0.05;皮质:t=3.256 、2.624,P均＜0.05)增多.Western blot结果示大脑皮质和海马部位BDNF蛋白表达量变化规律:(1)海马:与损伤对侧比较,术后3d试验组损伤侧BDNF蛋白表达量减少(t=-3.388,P ＜0.05);与损伤对侧、对照组比较,术后14 d损伤侧蛋白表达量增加(t=4.874、4.646,P均＜0.05).(2)皮质:与损伤对侧、对照组比较,术后3d损伤侧蛋白表达量减少(t=-7.386、-3.256,P均＜0.05);与对照组比较,术后7d损伤侧蛋白表达量增加(t=4.439,P＜0.05);与损伤对侧、对照组比较,术后14 d损伤侧蛋白表达量增加(t=24.161、3.942,P均＜0.05).结论 HI损伤早期大脑皮质和海马BDNF阳性细胞数和蛋白表达量均减少,而恢复期BDNF阳性细胞数量和蛋白表达量升高,BDNF可能在未成熟新生鼠HI脑损伤的恢复中起一定作用.
