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SB431542和TGF-β1对甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF基因表达的影响
目的 探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和SB431542(TGF-β1受体酶抑制剂)对甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)患者眼眶成纤维细胞α平滑肌激动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因表达的影响,为TAO眼外肌纤维化的治疗寻找潜在的药物治疗靶点.方法 实验分为3组.第1组:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time PCR,RT-PCR)检测不同浓度TGF-β1(0μg·L-1、1 μg·L-1、5μg·L-1、10 μg·L-1、20 μg·L-1)刺激TAO患者眼眶成纤维细胞后α-SMA及CT-GF mRNA的表达情况;第2组:采用RT-PCR检测10 μg· L-1 TGF-β1在不同的时间点(Oh、3h、6h、12 h、24 h、48 h)刺激TAO患者眼眶成纤维细胞后oα-SMA及CTGF mRNA的表达情况;第3组(分为4小组处理):眼眶成纤维细胞不加任何干预、使用30 μmol·L-1 SB431542刺激眼眶成纤维细胞、10 μg·L-1 TGF-β1单独刺激眼眶成纤维细胞、30 μmol·L-1 SB431542联合10 μg·L-TGF-β1刺激眼眶成纤维细胞(SB431542预先刺激眼眶成纤维细胞1h,然后再加入TGF-β1),采用RT-PCR检测α-SMA及CTGF mRNA的表达.结果 TGF-β1在一定的浓度范围内(1～10 μg·L-1)以剂量依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-SMA mRNA及CTGFmRNA,随着浓度增加mRNA表达增加,各浓度组(1μg·L-1、5 μg· L-1、10 μg·L-1、20 μμg·L-1)与空白对照组(0μg·L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).TGF-β1在一定的时间范围内(0～24 h)以时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-SMA mRNA及CTGF mRNA,随着时间延长mRNA表达增加,各时间组(3h、6h、12 h、24 h、48 h)与Oh相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).10 μg·L-1的TGF-β1诱导眼眶成纤维细胞表达α-SMA mRNA在24 h达到峰值,而CTGF mRNA在12h即可达到峰值.SB431542对眼眶成纤维细胞α-SMA mRNA及CTGF mRNA的表达均有抑制作用.结论 一定范围内,TGF-β1以剂量和时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF mRNA的表达,SB431542可抑制其表达.
