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诱导全能干细胞文献资料
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真核基因重组Sox2及其在小鼠角膜基质细胞中的表达
目的 基因重组构建具有穿膜活性的核转录因子Sox2真核表达系统,将其转染至小鼠角膜基质细胞,检测其在小鼠角膜基质细胞中的表达.方法 利用重叠延伸PCR法重组目的基因Sox2-PTD构建质粒,测序检测重组DNA序列是否克隆正确.确定正确序列后将其转染至小鼠角膜基质细胞.倒置显微镜下观察细胞生长情况,转染后约10 d免疫荧光化学鉴定其表达.结果 成功构建质粒PCDNA3.1-Sox2-PTD；4个转录因子测序结果显示:Sox2基因测序结果与基因模板序列100％一致；成功转染至小鼠角膜基质细胞中；荧光显微镜下观察可见,Sox2-PTD在细胞浆和细胞核内均有表达,主要分布在细胞核内.结论 成功构建核转录因子的真核表达系统,可转染至小鼠角膜基质细胞并引起细胞形态和表型的变化,为真核重组外源蛋白诱导角膜基质细胞转化为多能干细胞奠定基础.
