体外受精与体外培养对小鼠囊胚发育潜能的影响

目的 评估体外受精和体外培养对囊胚期胚胎细胞数及发育潜能的影响. 方法 (1)雌性ICR小鼠,自然交配获取囊胚为In vivo组,体内受精-体外培养获取囊胚为IVC组,体外受精获取囊胚为IVF组;(2)对三组囊胚行免疫杀伤法检测并在荧光显微镜下计数总细胞数、内细胞团细胞数、内细胞团与总细胞数的比值;(3)提取三组小鼠囊胚mRNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测Pou5f1等细胞因子的mRNA表达水平;(4)三组囊胚移植入D3.5假孕鼠,取D10.5胚胎进行形态学检测,计算胚胎植入率、成活率、流产率. 结果 (1)IVF组和IVC组囊胚与In vivo组相比,细胞总数、滋养外胚层(TE)细胞数、内细胞团(ICM)细胞数均显著降低(P＜0.01),TE/ICM细胞数的比值三组之间无显著差异(P＞0.05);(2)IVF组和IVC组囊胚与In vivo组相比,多潜能基因OCT4、Nanog、Sox2表达水平相对上调,而早期细胞命运分化相关基因Fgf4、Gata4、Sox17、Eomes、Elf5、Lif表达水平下调,差异有统计学意义(P＜0.05);(3)三组间胚胎植入率无显著性差异(P＞0.05),而IVC组、IVF组活产率显著低于In vivo组,流产率显著高于In vivo组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 体外受精会导致囊胚质量下降,并影响胚胎植入后的进一步发育,导致胚胎成活率降低.

SOX2与上皮间质转化在结肠直肠癌细胞系SW620中的相关性分析

目的:通过基因沉默干细胞转录因子SOX2,研究其与结肠直肠癌细胞系SW620上皮间质转化相关因子表达的相关性.方法:设计SOX2 ShRNA病毒颗粒并转染至SW620中,RT-PCR和Western Blot检测细胞中SOX2、β-catenin、E-cadherin、vimentin的表达情况.结果:SOX2沉默细胞株中SOX2、β-catenin、Vimentin mRNA及蛋白表达减弱,E-cadherin mRNA及蛋白表达增强,差异显著(P<0.05).结论:沉默SW620结肠直肠癌细胞系SOX2基因的表达可以降低Wnt/β-catenin信号通路活性,减少EMT过程从而有效抑制肿瘤细胞体外侵袭及迁移能力.

SOX2在神经损伤修复中的研究进展

SOX2是一种转录因子,通过转录后的基因调节发挥许多重要的生物学作用,尤其对维持神经祖细胞、前体细胞、干细胞稳态非常重要.SOX2的表达水平调控是通过基因层面实现的.研究发现调控SOX2可以修复受损的神经细胞,防止神经的缺血性损伤,为脑卒中后神经损伤修复提供了新证据.

Sox2、EpCAM在三阴乳腺癌及其癌症转移灶中的表达与临床意义

目的 检测Sox2、EpCAM在三阴乳腺癌及其癌症转移灶中的表达并探讨其临床意义.方法 选择2015年1月至2016年12月我院收治的30例发生癌症转移的三阴乳腺癌患者,作为观察组.并选取同期的非三阴乳腺癌患者30例作为对照组,对观察组和对照组癌症原发灶及转移灶进行 Sox2、EpCAM的表达分析.结果 观察组30例三阴乳腺癌中,TNM分期越高,Sox2的表达越高,Ⅲ期阳性率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05),而EpCAM的表达差异不具有统计学意义(P>0.05);组织学分级越高,Sox2、EpCAM的表达也越高,Ⅲ级阳性率显著高于Ⅰ级和Ⅱ级,差异有统计学意义(P<0.05).Sox2在观察组转移灶的阳性表达率(93.3%)高于原发灶(70.0%),且显著高于对照组(43.3%),差异具有统计学意义(P<0.05);EpCAM 在观察组转移灶中的阳性表达率(86.7%)与原发灶(80.0%)相比,差异无统计学意义(P>0.05),与对照组(53.3%)相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 在三阴乳腺癌中SOX2、EpCAM蛋白均呈高表达,可作为临床检测三阴乳腺癌的一个参考指标,且在转移灶中显著表达,也可作为癌症转移的辅助诊断指标.

SOX2和CTBP1相互作用对非小细胞肺癌转移的意义

目的 探讨SOX2和CTBP1异常表达在非小细胞肺癌(NSCLC)转移中的作用机制.方法 Western blot检测新鲜NSCLC组织及相应的癌旁组织中SOX2和CTBP1蛋白表达;免疫沉淀法分析SOX2和CTBP1在非小细胞肺癌细胞和组织中有无相互作用;用免疫组织化学染色法(IHC)检测114例NSCLC石蜡标本中SOX2和CTBP1蛋白表达;通过转染质粒分析SOX2-CTBP1相互作用的调节机制及其对非小细胞肺癌转移的影响.结果 SOX2和CTBP1的表达水平在肺癌组织中要明显高于癌旁组织(P<0.05);SOX2-CTBP1能形成复合物,SOX2、CTBP1在NSCLC转移组中的表达水平明显高于非转移组的表达水平(P<0.05).CTBP1的高表达与肿瘤分期、组织分化程度﹑SOX2表达、Ki-67表达相关(P<0.05).在细胞水平,干扰CTBP1表达可下调SOX2及其下游靶基因Snail的表达,从而使H1299细胞体外迁移能力受到抑制.结论 SOX2和CTBP1的异常表达可能与NSCLC发生、发展有关,并且SOX2-CTBP1相互作用可能促进了NSCLC的侵袭转移.

胚胎干细胞增殖分化相关基因

胚胎于细胞是从早期胚胎内细胞团中分离得到的,可以长久维持对称性自我更新的未分化状态,也可以分化成机体几乎所有类型的细胞.多种基因参与了胚胎干细胞增殖分化的调节.现对胚胎干细胞增殖分化相关基因进行综述.

SOX2与survivin在非小细胞肺癌中的表达及临床病理意义

目的 观察非小细胞肺癌(NSCLC)中SOX2与survivin的表达情况,探讨它们在NSCLC发生和抗凋亡过程中的作用及相互关系.方法 制作67例NSCLC和20例肺良性病变共87例组织的组织芯片,采用免疫组化技术检测SOX2与survivin的表达.结果 ①SOX2、survivin在NSCLC中的阳性率分别为74.6％、71.6％,均显著高于肺良性病变组织;②NSCLC中SOX2的阳性率与患者的病理类型、分化程度、淋巴结转移及临床分期有关;survivin的表达与TNM分期有关;③NSCLC中SOX2与survivin的表达呈正相关.结论 SOX2可能参与NSCLC的发生、发展,并通过调节survivin的表达在抗凋亡过程中发挥作用,二者可作为判断NSCLC预后的指标,并很可能成为新的治疗靶点.

乳腺癌中SOX2表达与血管生成的关系及意义

目的 探讨乳腺癌中SOX2表达与血管生成的关系及意义.方法 采用免疫组化SP法检测90例乳腺癌中SOX2的表达,并用CD105标记血管.结果 SOX2阳性率、MVD值在淋巴结转移组为84.6％、11.51±2.11,无淋巴结转移组为44％、10.00±1.63,差异显著(P＜0.01).SOX2阳性率、MVD值在组织学分级Ⅱ～Ⅲ组为82.4％、11.40±2.13(P＜0.01),Ⅰ级组为45.5％、10.14±1.67(P ＜0.05),差异均显著.MVD值在SOX2阳性组为11.62±2.05,阴性组为9.63 ±1.41,差异显著(P＜0.01).结论 SOX2阳性提示肿瘤的高侵袭性.SOX2可能通过促进血管生成导致肿瘤淋巴结转移.

SOX2在甲状腺癌组织中的表达及意义

目的：探讨甲状腺癌组织中SOX2 mRNA和蛋白的表达及意义。方法收集68例甲状腺癌组织及30例正常甲状腺组织，利用原位杂交检测SOX2 mRNA以及利用免疫组化检测蛋白的表达。结果正常黏膜组织中SOX2 mRNA的表达率为6.67%（2/30），显著低于其在癌组织中的表达情况55.88%（38/68），组间比较差异具有统计学意义（χ2=18.885，P ﹤0.05）；免疫组化显示SOX2蛋白癌组织中的表达率63.24%（43/68），远远高于其在正常黏膜组织中蛋白的表达情况30%（9/30），组间比较差异具有统计学意义（χ2=7.946，P ﹤0.05）。甲状腺癌组织中SOX2 mRNA和蛋白的表达与癌组织的分化程度、浸润深度、TNM分期及有无淋巴结转移均密切相关，组间比较差异均有统计学意义（ P ﹤0.05）。同时，利用相关性分析发现 SOX2在基因和蛋白水平的表达呈正相关（ r =0.258，P ﹤0.05）。结论甲状腺癌组织中SOX2 mRNA和蛋白的高表达可能与甲状腺癌的浸润转移密切相关。同时，其异常高表达可能与甲状腺癌的恶性转化相关。

SOX2在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的:探讨食管鳞癌组织中SOX2 mRNA和蛋白的表达及意义.方法:应用原位杂交和免疫组织化学法分别检测35例正常食管黏膜组织及84例食管鳞癌组织中SOX2 mRNA和蛋白的表达.结果:SOX2在正常黏膜组织中mRNA的表达率为8.6％(3/35),显著低于其在癌组织中的表达率46.4％(39/84),组间比较差异具有统计学意义(x2=15.504,P＜0.05)；SOX2蛋白表达与其mRNA表达一致,在正常黏膜组织中蛋白的表达率为31.4％(11/35),显著低于其在癌组织中的表达率53.6％(45/84),组间比较差异具有统计学意义(x2=4.862,P＜0.05).食管鳞癌组织中SOX2 mRNA和蛋白的表达与癌组织的分化程度、浸润深度、TNM分期及有无淋巴结转移均密切相关,组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).此外,SOX2 mRNA和蛋白的表达具有明显的正相关关系(γp=0.399,P＜0.05).结论:食管鳞癌组织中SOX2 mRNA和蛋白的高表达可能与食管鳞癌的浸润转移密切相关.同时,其异常高表达可能与食管癌的恶性转化相关.

Sox基因的异常表达与乳腺癌研究的进展

Sox基因家族是一类SRY相关基因构成的基因家族,编码一系列Sox家族的转录因子.Sox基因在个体发育过程中参与了性别决定和分化、神经发育、软骨形成等多种发育过程.近年研究者发现,Sox基因的异常表达与乳腺癌的发生、发展有一定关系,如Sox2、Sox4的过表达与乳腺癌的发生相关;Sox7和Sox17在乳腺癌中可作为抑癌基因,其表达下调可激活Wnt/β-catenin信号通路,与乳腺癌的发生发展有一定关系.

Nanog、Sox2、TFF3在肠型胃癌中的表达及其与肠型胃癌预后关系的研究

目的 探讨Nanog、Sox2、TFF3在肠型胃癌中的表达及其与肠型胃癌预后的关系.方法 回顾性分析60例肠型胃癌患者的临床资料,应用免疫组化法检测Nanog、Sox2、TFF3在肠型胃癌患者中的表达情况,分析其表达情况与患者临床病理特征及预后的关系.结果60例肠型胃癌患者中,Nanog高表达者38例(63.3%)、TFF3高表达者33例(55.0%),Sox2低表达者35例(58.3%).单因素分析结果显示,Nanog、TFF3、Sox2的表达情况与肠型胃癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移情况及TNM分期有关(P﹤0.05),与肠型胃癌患者的年龄、性别、肿瘤部位无关(P﹥0.05).多因素分析结果显示,Nanog、Sox2、TFF3的表达情况与肠型胃癌患者的无病生存期和总生存期有关,同时具有Nanog高表达、TFF3高表达、Sox2低表达的肠型胃癌患者预后差.结论Nanog、Sox2、TFF3可成为评价肠型胃癌患者预后的生物标志物,联合检测更利于判断肠型胃癌患者的预后.

SOX2在结直肠癌表达的临床观察

目的：观察SOX2在结直肠癌组织的表达情况，探讨SOX2在结直肠癌中表达的临床意义。方法收集103例有60～125个月（中位随访时间84个月）随访资料的结直肠癌及其相应的正常结直肠黏膜标本，应用免疫组化方法检测SOX2的表达，分析SOX2表达与临床特征的关系。结果结直肠癌组织中SOX2蛋白的表达率显著高于癌旁正常肠黏膜（P＜0.001）；SOX2表达与结直肠癌分化程度显著负相关（P＜0.01），与结直肠癌TNM分期、淋巴结转移个数及远处转移程度正相关（P＜0.05）。SOX2表达与结直肠癌患者术后5年生存率和3年无瘤生存率也具有相关性（P＜0.05）。结论 SOX2蛋白异常表达可作为提示结直肠癌预后判断的重要参考指标。

结肠癌组织中MTA1的表达水平及定位与患者预后的相关性研究

目的 研究结肠癌组织中MTA1的表达水平及在细胞核、细胞质内的定位情况,分析其与结肠癌预后的相关性,并探讨其可能的机制.方法 采用免疫组织化学染色方法在结肠癌组织芯片(30例肠癌组织、10例转移组织、8例正常组织)中检测MTA1与Sox2蛋白的表达水平及定位情况,统计分析二者与临床病理资料及预后的相关性;并初步探讨Sox2与MTA1表达的相关性.结果 ①肠癌组织及转移组织中MTA1细胞质染色强度均显著高于正常组织(P＜0.05),而肠癌组织与转移组织间MTA1表达差异不显著(P＞0.05);②MTA1在细胞质的表达强度与临床分期呈正相关(P＝0.03),生存时间＜5年的肠癌患者的肿瘤组织细胞质内MTA1的表达强度显著高于生存时间≥5年的患者组织(P＝0.007);③Sox2在肠癌组织细胞核及细胞质内的表达均与MTA1细胞质表达具有显著的相关性(P＜0.01).结论 MTA1细胞质过表达提示结肠癌预后不良,这可能与Sox2的过表达相关.

转录因子SOX2在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨转录因子SOX2在胃癌组织中的表达情况及其与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学技术检测67例胃癌组织中SOX2的表达,并选取30例远端切缘胃壁组织作为对照.结果 SOX2在胃癌组织中的阳性表达率为52.24％(35/67),显著低于对照组胃壁组织的阳性表达率93.33％(28/30),差异有统计学意义(x2=16.326,P＜ 0.01);在胃癌组织中SOX2的阳性表达率与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移以及临床分期有关,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 SOX2表达下调与胃癌的早期发生有关,并与淋巴结转移及TNM分期密切相关,SOX2可作为预测胃癌预后的生物学指标.

Hair follicle-derived neural crest stem cells can be induced to differentiate into Schwann cells in vivo and in vitro. However, the underlying regulatory mechanism during cell differentiation remains poorly understood. This study isolated neural crest stem cells from human hair folli-cles and induced them to differentiate into Schwann cells. Quantitative RT-PCR showed that microRNA (miR)-21 expression was gradually increased during the differentiation of neural crest stem cells into Schwann cells. After transfection with the miR-21 agonist (agomir-21), the differentiation capacity of neural crest stem cells was enhanced. By contrast, after transfection with the miR-21 antagonist (antagomir-21), the differentiation capacity was attenuated. Further study results showed that SOX-2 was an effective target of miR-21. Without compromising SOX2 mRNA expression, miR-21 can down-regulate SOX protein expression by binding to the 3′-UTR of miR-21 mRNA. Knocking out the SOX2 gene from the neural crest stem cells significantly reversed the antagomir-21 inhibition of neural crest stem cells differentiating into Schwann cells. The results suggest that miR-21 expression was increased during the differentiation of neural crest stem cells into Schwann cells and miR-21 promoted the differentiation through down-regu-lating SOX protein expression by binding to the 3′-UTR of SOX2 mRNA.

人Sox2和Nanog基因的克隆及其对胎肺成纤维细胞分化的影响

目的 克隆人Sox2、Nanog基因编码序列,构建pSG5-Sox2及pSG5-Nanog真核表达重组质粒,转染胎肺间质成纤维细胞,观察Sox2、Nanog基因表达并鉴定其功能.方法 应用RT-PCR方法分别从4～6周龄流产胎儿脑组织和膀胱癌细胞中扩增出Sox2及Nanog基因编码全序列,将其连接至pSG5表达载体.经测序比对后,将重组质粒pSG5-Sox2及pSG5- Nanog转染胎肺成纤维细胞,采用免疫细胞化学法检测Sox2及Nanog基因表达情况,倒置显微镜观察转染前后细胞的形态学变化.结果 人Sox2基因和Nanog基因编码序列全长957bp和934bp,重组质粒pSG5-Sox2、pSG5-Nanog测序成功,BLAST比对成功,转染胎肺成纤维细胞后,免疫细胞化学检测到Sox2、Nanog阳性表达.转染后胎肺成纤维细胞形态学先呈现干细胞样变化,进而分化为上皮样细胞,CK(广谱)染色阳性,并有向神经细胞分化的趋势,巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶染色阳性.结论 克隆了人Sox2、Nanog基因,成功转染胎肺成纤维细胞并检测到基因阳性表达,胎肺间质成纤维细胞呈干细胞样生长并有向上皮及神经样细胞分化的趋势,为进一步研究Sox2和Nanog基因功能及重编程细胞分化奠定了基础.

二甲双胍对ALDH+胃癌干细胞的抑制作用及其机制

目的 探讨二甲双胍(Met)对乙醛脱氢酶(ALDH)阳性胃癌干细胞的抑制作用及其可能机制.方法 选择人胃癌细胞系MKN45作为亲本细胞,采用流式细胞仪分选出ALDH+和ALDH-细胞,进行白我更新能力、分化能力、裸鼠移植瘤实验,鉴定其是否为胃癌干细胞及是否具备肿瘤干细胞特性.实验设置lmmol/L Met组、5mmol/LMet组和MKN45细胞组,分别作用48h后,检测各组ALDH+细胞的比例;RT-PCR实验检测各组Oct4、Sox2、AKT基因表达量的变化.结果 细胞鉴定实验结果显示,ALDH+细胞的自我更新能力、分化能力、致瘤能力均高于ALDH细胞,表明ALDH+细胞具有肿瘤干细胞特性.实验结果显示,MKN45细胞组、1mmol/L Met组、5mmol/L Met组ALDH+细胞比例分别为36.5％±5.4％、15.6％±1.9％和7.6％±1.6％,三组差异有统计学意义(P＜o.01).RT-PCR结果显示,Met处理后Sox2和AKT基因的表达量均下降,且随Met浓度升高下降更为明显;Oct4基因在1mmol/L Met组的表达量高于MKN45细胞组,5mmol/L Met组的表达量低于MKN45细胞组.结论 Met能抑制ALDH+胃癌干细胞生长,抑制AKT基因的表达,可作为临床治疗胃癌的靶点药物.

Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因慢病毒载体的构建

目的 构建Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因慢病毒表达载体,为诱导性多能干细胞研究奠定基础.方法 将Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因利用Infusion技术重组构建慢病毒载体穿梭质粒pGC-FU-Oct4、pGC-FU-Sox2、pGC-FU-c-Myc、pGC-FU-Klf4,经PCR和测序后与与结构质粒pHelper1.0和包膜质粒pHeiper2.0在脂质体Lipofeetamine2000介导下共转染293T细胞包装生产慢病毒,浓缩纯化后检测滴度.结果 PCR扩增和测序结果证实成功构建Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4的慢病毒载体并包装慢病毒,检测Oct4基因重组慢病毒、Sox2基因重组慢病毒、c-Myc基因重组慢病毒的滴度均为1×109TU/mL,Klf4基因重组慢病毒的滴度为1.9×109 TU/mL.结论 成功建立重组慢病毒载体的三质拉包装细胞系统.