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罗格列酮对哮喘小鼠气道炎症和肺组织细胞因子信号抑制因子3和5mRNA表达的影响
目的:研究罗格列酮对哮喘小鼠气道炎症的影响.方法:24只BALB/c小鼠分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和罗格列酮组(C组),每组8只.B和C组通过卵清蛋白(OVA)致敏建立小鼠哮喘模型,C组建模同时吸入罗格列酮5×10<'-5>mol/L.HE染色观察肺组织病理学形态;ELISA方法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中自细胞介素4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量;RT-PCR方法检测小鼠肺组织细胞因子信号抑制因子(SOCS)3和SOCS5 mRNA的表达.结果:B组小鼠气道黏膜充血水肿,黏膜层增厚,支气管壁及血管壁周围有较多炎细胞浸润;C组仅有少量炎细胞浸润.3组IL-4和IFN-γ含量比较,差异有统计学意义(F=112.234和58.977,P均<0.001),与A组比较,B组IL-4含量增多,IFN-γ含量减少(P均<0.05);与B组比较,C组IL-4含量减少,IFN-γ含量增多(P均<0.05).3组SOCS3和SOCS5 mRNA 含量比较,差异有统计学意义(F=38.746和87.235,P均<0.001),与A比较,B组SOCS3 mRNA 的表达增高,SOCS5 mRNA 的表达降低(P均<0.05);与B组比较,C组SOCS3 mRNA的表达减少,SOCS5 mRNA表达的增加(P均<0.05).结论:罗格列酮能抑制哮喘小鼠气道炎症反应,其作用机制可能与抑制SOCS3和增加SOCS5的mRNA表达有关.
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miR-155对乙型肝炎病毒复制及PTEN表达的影响
目的 构建mmu-miR-155真核过表达载体pmR-155,探讨其在乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠中对HBV复制及PTEN基因表达的调控作用. 方法 PCR扩增mmu-miR-155的前体基因片段(pre-mmu-miR-155),双酶切后连接到pmR-mCherry载体上,通过菌落PCR、双酶切和测序验证重组载体的准确性.将重组载体采用高压尾静脉法注入HBV转基因小鼠体内作为实验组,同时设空质粒组(注入pmR-mCherry空质粒)、空白组(注入等体积磷酸盐缓冲液),7d后qPCR检测各组细胞miR-155的表达情况,14d采用酶联免疫吸附法检测干扰素(IFN)γ表达量;1个月后qPCR检测肝内细胞因子信号抑制物(SOCS)1、PTEN基因mRNA表达量及Western blot检测肝内SOCS1、PTEN、HBX蛋白表达水平.两组数据比较采用独立样本t检验;三组数据比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD法. 结果 经菌落PCR、双酶切和测序证实,pre-mmu-miR-155基因片段成功插入pmR-mCherry载体中.注入质粒7d后,实验组表达miR-155的水平明显升高(t=8.90,P＜0.01);注入质粒14 d后,实验组IFN γ表达量较空白组升高(F=26.58,P＜0.01);注入质粒30 d后,实验组肝内SOCS1、PTEN mRNA (FSOCSI mRNA=19.72,P＜ 0.01;FPTEN mRNA=7.38,P＜0.05)及蛋白表达水平(FSOCS1=50.30,P＜0.01;FPTEN=129.00,P＜0.01)均下降,同时HBX表达水平下降(FHBX=77.97,P＜ 0.01). 结论 成功构建mmu-miR-155真核过表达载体pmR-155,该重组载体可稳定表达mmu-miR-155;miR-155可以通过下调SOCS1表达,进而促进IFN γ的表达,增强HBV转基因小鼠的抗HBV能力.与此同时,miR-155可下调PTEN的表达,有潜在的促进肝癌发生的可能.
