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食品级表达载体文献资料
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乳酸菌中幽门螺杆菌ureB基因的食品级表达与优化
目的:以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)为宿主菌构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)尿素酶B(UreB)的食品级表达系统.方法:从重组质粒pMD19-T-ureB上酶切得到ureB基因片段,与含有筛选标记lacF基因的L.lactis表达载体pNZ8149经双酶切后定向连接,应用PCR、酶切和测序的方法鉴定重组子.重组菌用乳联菌肽诱导表达,用正交表实验进行表达条件的优化,通过SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定.结果:重组菌Nz3900/pNz8149-ureB经鉴定与预期相符.优化结果显示在菌体培养到D600nm为0.40左右时加入终浓度为25μg/L的乳联菌肽诱导5 h产量高,通过Western blot能检测到UreB的表达.结论:构建了ureB基因食品级表达系统,并得到了表达的优条件.
