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THP-1细胞中核因子-κB信号通路的活化状态及其抑制剂pathenolide对细胞增殖、凋亡的影响
目的:探讨急性单核细胞白血病THP-1细胞株中核因子-κB(NF-κB)信号通路的活化状态及其抑制剂pathenolide(PN)对细胞增殖、凋亡的影响.方法:THP-1细胞置于37℃、体积分数为5%CO2培养箱中培养.①收集处于对数增殖期的细胞,采用RT-PCR方法检测THP-1细胞中P65、IkBα mRNA的表达.②用细胞裂解液分别提取THP-1的细胞质和细胞核蛋白,采用Western Blotting法检测细胞质及细胞核中P65、IkBα蛋白的表达.③将处于对数增殖期的THP-1细胞分成10组[(空白对照孔、阴性对照孔及各实验孔(1、2、4、6、8、10、15、20 μmol/L PN)],按12h、24h 2个检测点计算细胞增殖抑制率及增殖半数抑制浓度(IC50)的范围.④将处于对数增殖期的THP-1细胞分为3组(空白对照、PBS对照和6 μmol/L PN处理组),按第0天至第6天设计,绘制细胞增殖曲线.⑤取处于对数增殖期的THP-1细胞,分5组(分别以0、2、4、6和8 μmol/L的PN处理)培养,24 h后收获细胞,分别检测细胞周期和细胞早期凋亡率.结果:①RT-PCR结果示THP-1细胞中有P65、IkBα mRNA的表达,Western blot-ting结果示细胞质中均有P65、IkBα蛋白的表达,细胞核中有P65蛋白的表达.②PN对THP-1有抑制作用,其抑制率在一定范围内存在着剂量-效应关系,测定范围内大抑制率可达(69.56±2.52)%;PN作用12h、24h的IC50分别为8-10 μmol/L、6～8 μmol/L.③以6μmol/L的PN处理后,THP-1细胞增殖曲线明显下降.④在2-6 μmol/L范围内,随PN浓度增高,G0/G1期细胞构成增高;在2～8 μmol/L范围内,S期细胞随PN浓度的增加而减少.0、2、4、6及8 μmoL/L PN组细胞早期凋亡率分别为(3.84 ±1.50)%、(4.67 ±1.97)%、(12.67 ±2.13)%、(17.72 ±2.78)%和(23.62 ±3.36)%,差异有统计学意义(F=36.280,P<0.001).结论:THP-1细胞中有NF-κB通路的持续激活,PN对THP-1细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用.
关键词： 急性髓细胞白血病 核因子-κB pathenolide 细胞增殖 细胞凋亡
