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人β-微管蛋白2C基因文献资料
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人β-微管蛋白2C蛋白的原核表达与纯化
目的 构建体外原核表达和纯化人β-微管蛋白2C(TubB2C)蛋白.方法 通过聚合酶链反应(PCR)扩增出人TubB2C基因完整开放读码框架(ORF),并插入pGEX-6P.1载体中构建pGEX-TubB2C重组质粒.经大肠杆菌BL21转化后,用异丙醇-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导谷胱甘肽S转移酶(GST)-TubB2C融合蛋白表达,用免疫印迹(Western blot)分析鉴定表达的GST-TubB2C蛋白,并在非变性条件下利用Glutathione Sepharose 4B纯化GST-TubB2C蛋白.结果 酶切分析和DNA测序表明TubB2C cDNA完整ORF以正确的阅读框架插入pGEX-6P-1载体;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示表达的GST-TubB2C蛋白相对分子量约为78 000,Western blot结果显示该融合蛋白可被抗GST抗体特异性识别.纯化后的GST-TubB2C蛋白纯度约90%.结论 TubB2C蛋白可在体外大量表达和纯化.
关键词： 人β-微管蛋白2C基因 原核表达 蛋白纯化
