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IRE1a文献资料
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靶向 IRE1a 干扰质粒构建及对 ERS 时细胞增殖及凋亡的影响
目的 构建靶向人IRE1a 的 shRNA 干扰质粒(pSUPER-IRE1a)并观察其对人 HeLa 细胞和HepG2 细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计并合成靶向 IREla 基因的两条 shRNA,分别克隆至真核表达载体 pSUPER 构建重组质粒 ps1、ps2,依次转染入 HeLa 细胞和 HepG2 细胞中.采用RT-PCR 检测 pS1、ps2转染前后IRE1a 在 HeLa 细胞和 HepG2 细胞中的 mRNA 水平,免疫印迹检测 psl、ps2 转染前后 IRE1a 蛋白的表达;MTT 比色法、BrdU/DAPI 双免疫荧光法及流式细胞仪分别检测各重组质粒对 HeLa 细胞和 HepG2细胞增殖及凋亡的影响.结果 干扰质粒(pSUPER.IREIa)能有效抑制 HeLa 细胞和 HepG2 细胞中IRE1a 基因的表达;成功转染后,细胞处于内质网应激 (ER stress) 状态时,各实验组细胞增殖率及凋亡率与对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建靶向人 IREla 的 shRNA 真核表达载体pS1、ps2,有效抑制了 HeLa 细胞和 HepG2 细胞中 IRE1a 的表达;细胞处于 ERS 状态时,IREla-shRNA有效促进HeLa、HepG2 两种肿瘤细胞的增殖;抑制 HeLa 和 HepG2 细胞的凋亡.
