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强型绿色荧光蛋白真核表达载体文献资料
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Salusin-a基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达
目的:研究增强型绿色荧光蛋白真核表达载体Salusin-a(pEGFP-Salusin-a)的构建及在人胚胎肾细胞系293细胞(HEK293)中的表达.方法:提取人单核细胞系THP-1细胞Salusin-a 的mRNA,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Salusin-a基因,克隆入pEGFP- N3载体,双酶切、菌落PCR及测序鉴定pEGFP-Salusin-a质粒.用脂质体转染pEGFP-Salusin-a入HEK293细胞,分为转染细胞组、质粒对照组和空白对照组,检测分析各组荧光蛋白和Salusin-a基因的表达.结果:成功构建pEGFP-Salusin-a质粒,并转染HEK293,细胞转染效率86%,转染细胞组和质粒对照组绿色荧光蛋白的表达明显高于空白对照组(P<0.05);转染细胞组Salusin-a mRNA的表达明显高于质粒对照组和空白对照组(P<0.05).结论:重组pEGFP-Salusin-a质粒能转染HEK293细胞并表达Salusin-a,为Salusin-a基因功能的进一步研究提供了实验基础.
