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knob蛋白文献资料
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Ad5-knob蛋白在大肠杆菌中可溶性表达及其活性检测
采用PCR技术, 从AdEasy-1质粒DNA中获得knob全长序列, 克隆入pGEM-T vector中.DNA测序鉴定后, 构建pQE-30/knob重组表达载体, 转化大肠杆菌M15 pREP4),IPTG诱导表达腺病毒5型纤维蛋白的knob功能域(Ad5-knob), SDS-PAGE分析,表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂解液上清之中.经Ni2+-NTA亲和层析一步分离纯化后,洗脱产物中Ad5-knob蛋白纯度超过95%.N-端氨基酸测序证实了纯化产物为Ad5-knob蛋白,细胞受体结合实验检测到所得蛋白能够与Hela细胞上的相应受体特异性结合.上述结果表明在大肠杆菌中已经高效表达了可溶性Ad5-knob蛋白,一步即纯化该蛋白,并具有良好的生物活性,为其下阶段的深入研究提供了重要的实验材料.
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腺病毒5型knob蛋白的原核表达、纯化及其单克隆抗体的制备
目的:表达、纯化腺病毒5型knob蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb).方法:克隆并表达腺病毒的knob蛋白,其氨基端带有6-His标签.纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb.结果:成功表达了knob蛋白.SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量(Mr)约为23 000.获得了2株分泌针对knob的杂交瘤细胞系(8D7和6D4),其分泌的mAb的Ig亚类(型)均为IgG2b.ELISA检测,对应腹水mAb的效价分别为1∶2.1×105,1∶2.2×105.Western blot结果显示抗knob mAb具有良好的特异性.结论:成功地制备了knob蛋白及其mAb.
