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白细胞介素-37在人HepG2细胞中的表达
[目的]研究白细胞介素-37(interleukin-37,IL-37)在人肝肿瘤细胞系(HepG2)细胞中的表达,及在炎症因子刺激下,HepG2细胞中IL-37表达水平的改变.[方法]在37℃、5％CO2条件下培养人HepG2细胞,以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激细胞,分别于刺激24 h、48 h、72 h后提取细胞,分别提取细胞总RNA、总蛋白,利用逆转录酶聚合链反应技术(RT-PCR)检测细胞中II-37-mRNA的表达,利用Western blot技术检测细胞中IL-37蛋白的表达水平.并且在LPS刺激细胞72 h后,运用免疫荧光和激光共聚焦技术检测IL-37在细胞中的表达定位.[结果]RT-PCR结果证明HepG2中存在IL-37-mRNA的表达,且随着LPS刺激时间的延长IL-37-mRNA表达增多,0 h(无刺激)、24 h、48 h、72 h灰度值分别为0.10±0.008、0.14±0.014、0.22±0.010、0.28±0.014;Westernblot结果显示细胞中存在IL-37蛋白的表达,且其表达趋势与IL-37 mRNA表达趋势相同,即随着刺激时间延长,HepG2中IL-37蛋白表达增多,由24 h、48 h、72 h分别为0.54±0.16、0.87±0.04、1.51±0.18;免疫荧光共聚焦结果显示IL-37在细胞核和细胞质中均有表达,以细胞核周围表达为丰富.[结论]人HepG2细胞中存在IL-37表达,炎症因子刺激后,IL-37 mRNA及IL-37蛋白表达水平均呈升高,趋势相同;IL-37在HepG2细胞质内和细胞核内均表达,以细胞核周围表达为丰富.
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TGF-β1对人肝癌细胞系凋亡的调控作用研究
目的肝细胞对TGF-β1敏感性的丧失据认为是肝癌重要的致病因素之一.本研究旨在明确人肝肿瘤细胞系中TGF-β1的作用及其与凋亡的关系.方法选用三种含不同p53基因状态的人肝肿瘤细胞系,应用脱氧核糖核苷酸末瑞转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)对TGF-β1诱导的肝肿瘤细胞的凋亡进行定量检测.结果在应用TUNEL检测三个细胞系中,TGF-β1仅能诱导Hep3B细胞(缺失p53)则凋亡较少.这提示凋亡p53基因的表达具有明确的联系.结论 HepG2细胞系比Huh-7和Hep3B系细胞更易发生TGF-β1诱导的凋亡,TGF-β1通过p53依赖性途径诱导肝癌细胞系发生凋亡.
