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AXP系统两步法制备文献资料
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脐血单个核细胞分离方法的比较研究
目的:探讨脐血单个核细胞的提取、冻存及复苏工艺,实现脐血单个核细胞的长久保存.方法:采集足月妊娠者脐血40～180 ml,运用Ficoll密度梯度离心法和AXP脐带血自动分离系统与Ficoll密度梯度离心法两步法分离脐血单个核细胞,采用非程控降温法降温,将细胞保存于-196℃液氮中.比较分析不同分离方法分离人脐血单个核细胞的细胞得率及活力;冷冻保护液配制分2组:无血清培养液+ 10％ DMSO+ 10％右旋糖酐和自体血浆+ 10％DMSO+ 10％右旋糖酐,根据冻存时间进行细胞复苏,分析其冻存前后的细胞活力、单个核细胞回收率、CD34+细胞数和CFU形成能力.结果:Ficoll密度梯度离心后获得的脐血单个核细胞活力为99.70％±0.30％,回收率为54.40％±4.52％;两步法分离脐血单个核细胞活力为99.60％±0.40％,回收率为62.12％±3.78％,2组回收率差异有统计学意义(P＜0.05).冻存6、12、24个月后,各时间点单个核细胞无血清培养液组复苏回收率和活力分别为80.75％±4.60％和91.75％±5.42％;自体血浆组复苏回收率和活力分别为81.55％±4.50％和92.65％±4.92％,组间差异无统计学意义.复苏后CD34+细胞占1.25％±0.70％,集落形成总数为(32.10士29.60)/105.结论:两步法分离脐血单个核细胞的回收率高于一步法,两种保护液的保护效果无显著差异.
