首页 > 文献资料
-
沉默微小RNA-16通过激活核因子-κB通路介导肝癌细胞化疗耐药
目的 探讨沉默SMMC-7721中微小RNA(miRNA,miR)-16的表达对化疗耐药的影响及机制.方法 采用慢病毒载体构建稳定细胞株,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-16的表达及Western blot检测靶基因κB激酶抑制剂β(IKBKB)的表达确定构建结果.采用Western blot及噻唑蓝(MTT)比色法检测各细胞株对紫杉醇的敏感性及耐药机制.结果 7721-miR16组的miR-16表达量显著高于SMMC-7721组及7721-mock组(6.06 ±0.18比1.00±0.13比0.87±0.03,P=0.000).7721-shmiR组靶基因IKBKB蛋白表达量是7721-shmock组的25.73倍(P=0.000).7721-shmiR16细胞株中多药耐药蛋白1(MDRl)表达显著增加,对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50)为4.903 μmol/L,是对照组(0.461μmol/L)的10.64倍(P=0.000).Western blot结果显示沉默miR-16主要通过激活细胞核因子-κB (NF-κB)通路导致MDR1表达增加.结论 沉默SMMC-7721中miR-16的表达,能显著增加IKBKB的表达,从而导致SMMC-7721细胞对紫杉醇耐药.
-
PPARγ促进miR-16表达抑制脓毒症炎症反应的作用研究
目的 探讨PPARγ上调miR-16的机制及其抑制脓毒症炎症反应的作用.方法 经Real time RT-PCR检测脓毒症患者和健康者的外周血单核细胞PPARγ和miR-16的表达,分析其相关性;分别用PPARγ激动剂RGZ、PPAR γsiRNA或miR-16抑制剂(antagomir-16)处理THP-1和RAW246.7,经real time RT-PCR和Western blot检测miR-16及其靶基因IKKα的表达;细胞转染含miR-16启动子的报告基因质粒,经PPARγ激动剂RGZ或拮抗剂GW9662处理后,检测细胞报告基因活性;细胞经PPAR γ激动剂RGZ处理,再经LPS处理,ELISA检测炎症因子TNFα和IL-6的表达;LPS诱导的脓毒症小鼠经PPAR γ激动剂RGZ,或经antagomir-16预处理后,再经PPARγ激动剂RGZ处理小鼠,real time RT-PCR检测小鼠外周血单核细胞中miR-16的表达,ELISA检测血清炎症因子TNFα和IL-6的表达.结果 脓毒症患者外周血单核细胞中PPARγ与miR-16的表达均降低且二者的表达呈显著负相关(P＜0.05);PPARγ通过促进miR-16的启动子活性上调miR-16的表达,进而抑制miR-16靶分子IKKα的表达(P＜0.05);PPAR γ上调miR-16后显著抑制炎症细胞产生TNFα和IL-6(P＜0.05);PPARγ上调miR-16抑制脓毒症小鼠血清TNFα和IL-6的表达(P＜0.05).结论 激动剂活化的PPARγ上调miR-16进而抑制细胞炎症因子表达及脓毒症小鼠炎症反应.
关键词： 过氧化物酶增殖激活受体γ 微小RNA-16 脓毒症 炎症 -
微小RNA-16对人肺泡上皮A549细胞肺表面活性物质相关蛋白的调控作用
目的 探讨微小RNA-16 (microRNA-16,miR-16)对肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)表达的调控作用.方法 体外培养人肺泡上皮A549细胞,应用miR-16模拟物、模拟物阴性对照、抑制剂、抑制剂阴性对照转染A549细胞,并同时设立空白对照组;采用细胞增殖-毒性检测实验测定各组细胞增殖能力;实时定量逆转录聚合酶链反应检测miR-16、SP-A、SP-B和SP-C mRNA表达;免疫印迹法检测SP-A、SP-B和SP-C蛋白水平.结果 模拟物组miR-16表达(34.11±1.79)明显高于模拟物阴性对照组(1.65±1.07)及空白对照组(1.07±0.50),抑制剂组miR-16表达(0.36±0.05)明显低于抑制剂阴性对照组(0.96±0.13)及空白对照组(1.05±0.20),差异均有统计学意义(P＜0.05).模拟物组和抑制剂组与空白对照组、模拟物阴性对照组及抑制剂阴性对照组比较,各时间点A549细胞增殖情况差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组(1.02±0.19、1.01±0.09、1.01±0.12)及模拟物阴性对照组(1.08±0.24、1.00±0.14、1.00±0.05)比较,模拟物组SP-A、SP-B和SP-C mRNA表达(0.58±0.16、0.67±0.05、0.61±0.12)降低;与空白对照组(1.02±0.19、1.01±0.09、1.01±0.12)及抑制剂阴性对照组(1.05±0.22、0.99±0.13、0.98±0.10)比较,抑制剂组SP-A、SP-B和SP-C mRNA表达(1.66±0.33、1.29±0.11、1.23±0.12)升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).各组细胞SP-A、SP-B和SP-C蛋白表达水平与mRNA表达趋势一致.结论 miR-16可抑制A549细胞肺表面活性物质相关蛋白的合成.
关键词： RNA 肺表面活性物质相关蛋白质类 微小RNA-16 A549细胞
