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下调Claspin抑制肝癌增殖的研究
目的 探讨Claspin (CLSPN)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达与患者临床特征的关系,观察其下调后抑制肝癌增殖.方法 利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析Claspin基因在374例肝癌组织和50例癌旁组织中的表达及其与患者生存和临床特征的关系;应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法和Western blot检测Claspin基因在Hep3B细胞株中的表达;应用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成实验鉴定Claspin下调后Hep3B细胞的增殖和克隆形成能力.经G418筛选稳定株接种裸鼠皮下成瘤,分3组,每组6只,绘制肿瘤生长曲线及组织学检查.结果 TCGA数据库分析可见Claspin基因在肝癌组织(5.643±1.599)中表达明显高于正常肝组织(2.752±1.674)(t=11.941,P=0.000),且在肝癌患者中Claspin基因低表达者总体生存(OS)时间和无疾病进展生存(PFS)时间均明显长于高表达者[(3.659±0.355)年比(2.289±0.357)年,Log Rank值=15.993,P =0.000;(6.072±0.426)年比(4.771 ±0.462)年,Log Rank值=11.830,P=0.001];Claspin基因的表达高低与肝癌的病理TNM分期(x2=6.149,P=0.013)、分化程度(x2=8.563,P=0.003)、甲胎蛋白水平(x2=11.202,P=0.001)显著相关,COX回归分析可见Claspin基因表达高低是患者生存的独立预测因素(r=0.579,P=0.009).Claspin表达下调后与空白组比较,Hep3B细胞的增殖能力在72 h时明显受抑制,抑制率为[(71.316±2.471)％,t=4.823,P=0.000],相对克隆形成细胞数明显减少[(28.000±3.152)％,t=39.540,P=0.000].裸鼠皮下肝癌移植瘤,Claspin下调组瘤体[(144.300±15.340) mm3]生长速度明显低于空白组[(377.000±20.280) mm3,t=22.410,P=0.000]或阴性对照(NC)组[(363.300±26.980) mm3,t=17.280,P=0.000];下调组Claspin蛋白表达显著低于空白组(t=8.367,P=0.000)及NC组(t=9.303,P=0.000).结论 在肝癌中Claspin显著高表达,Claspin高表达与肝癌预后差明显正相关,下调Claspin能抑制肝癌细胞和裸鼠移植瘤增殖.
