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二十二碳六烯酸诱导前列腺癌细胞凋亡的信号通路研究
目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)改变凋亡信号通路,引起前列腺癌细胞凋亡的机制.方法 利用RT2 Profiler Array-Apoptosis方法,寻找DHA诱导前列腺癌细胞凋亡的作用靶点,可见10个上调和5个下调基因,然后利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法,验证和筛选结果.结果 与对照组比较,DHA处理24h后,DU145细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-1、Caspase-3和Caspase-9转录水平,分别上调了2.06、4.88和12.10倍;促细胞凋亡的B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)基因上调了2.93倍,并且bax与B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)比值增加;细胞死亡诱导相关基因CIDEA和DFFA,分别上调了2.34和3.21倍;肿瘤坏死因子相关基因LTA和肿瘤坏死因子(TNF),分别上调了2.04和2.24倍;基因警察TP53的mRNA表达上调了2.97倍.另外,DU145细胞线粒体相关凋亡诱导基因(AIFM1)、蛋白激酶(Akt1)、BH3位点死亡诱导基因BID和BIRC6、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)转录水平的表达,均发生下调.不同浓度DHA刺激24 h后,在前列腺癌DU145细胞Caspase家族中,Caspase-1、Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12表达均明显增加,其中Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12的表达,与DHA刺激浓度有剂量依赖性关系;前列腺癌DU145细胞bax、CIDEA、DFFA、TNF和肿瘤蛋白P53(TP53)基因表达均明显增加;其中bax、CIDEA和TNF的表达与DHA刺激浓度有剂量依赖性关系;前列腺癌DU145细胞AIFM1、Akt1、BID、BIRC6和XIAP基因表达均明显下降;其中AIFM1、BID和XIAP的表达与DHA刺激浓度有剂量依赖性关系.结论 DHA通过改变Caspase家族等凋亡信号通路相关基因的表达,诱导前列腺癌细胞发生凋亡.
关键词： 前列腺腺癌 雄激素抵抗性前列腺癌 多不饱和脂肪酸 二十二碳六烯酸 -
多不饱和脂肪酸对前列腺癌细胞的促凋亡作用
目的 观察深海鱼油(Fish oil)、n-3系多不饱和脂肪酸(PUFA)中的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)、n-6系PUFA中的花生四烯酸(AA),对良性前列腺细胞和不同前列腺癌细胞的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)方法,检测Fish oil、EPA、DHA和AA对前列腺细胞和前列腺癌细胞生存率的影响;应用Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR),检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的基因表达水平.结果 与对照组比较,不同浓度Fish oil刺激PCS-440-010良性前列腺细胞24 h后,没有影响其生存率;不同浓度Fish oil刺激PC-3和DU145前列腺癌细胞24 h后,两种癌细胞生存率分别下降了27％和40％(P＜0.05);不同浓度Fish oil刺激LNCaP前列腺癌细胞24 h后,没有影响其生存率.分别给予n-3系PUFA中的EPA和DHA刺激24 h,均可以明显降低PC-3(分别下降13％和26％)和DU145(分别下降16％和30％)前列腺癌细胞的生存率(P＜0.05).给予不同浓度的AA刺激24 h,对DU145前列腺癌细胞的生存率无明显影响.给予DHA 50 μmol/L分别刺激DU145前列腺癌细胞12、24、48、72 h后发现,DU145细胞生存率与DHA刺激呈时间依赖性.Caspase-3的mRNA水平明显增高,呈浓度依赖性(P＜0.05).结论 DHA能够呈浓度、时间依赖性降低前列腺癌细胞的生存率,而对良性前列腺细胞无此影响.
关键词： 前列腺腺癌 雄激素抵抗性前列腺癌 多不饱和脂肪酸 二十二碳六烯酸 -
干扰CD326可抑制VCaP细胞雄激素受体表达并降低细胞的增殖、侵袭及迁移能力
目的 干涉前列腺癌细胞系VCaP细胞的CD326的表达,观察其对雄激素受体(AR)、前列腺特异性抗原(PSA)的表达以及前列腺癌细胞表型的影响,明确CD326与雄激素抵抗性前列腺癌发生之间的相关性.方法 构建CD326短发夹RNA(CD326shRNA)稳定感染的VCaP细胞株.Western blot法检测稳定感染细胞株中AR及PSA的水平变化,ELISA检测VCaP细胞培养上清中的PSA分泌水平.MTT法检测细胞增殖、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和AlexaFluor(R) 488标记的膜联素V/碘化丙锭(annexin V-Alexa Fluor(R) 488/PI)双染法检测细胞凋亡、细胞划痕实验检测细胞迁移、TranswellTM实验检测细胞侵袭能力.结果 下调VCaP前列腺癌细胞株中CD326表达后,VCaP细胞中AR及PSA的表达水平显著降低,细胞上清中PSA的分泌水平也显著降低,同时伴随细胞增殖、抗凋亡、侵袭以及迁移能力的显著降低.结论 下调VCaP细胞CD326水平可降低AR的表达,使前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力降低.
关键词： CD326 VCaP细胞 雄激素抵抗性前列腺癌 雄激素受体 前列腺特异性抗原
