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TPA反应元件文献资料
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食管癌细胞NGAL基因-416～+84区段存在TPA反应元件
目的本文旨在对NGAL基因启动子区及其附近是否存在TPA反应元件进行研究.方法 (1) 采用PCR法从食管癌细胞中克隆NGAL基因5′侧翼区-416～+84片段,然后分别插入质粒pGLB和pGLE, 构建pGLB-416和 pGLE-416荧光素酶报告基因表达载体; (2) 将pGLB-416和 pGLE-416分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109;(3) 用TPA刺激转染的EC109, 检测细胞相对荧光素酶活力,通过相对荧光素酶活力变化判定NGAL基因5′侧翼-416～+84区是否存在TPA反应元件, 同时进行生物信息学分析. 结果无论是pGLB-416还是 pGLE-416, 与pRL-TK共转染食管癌细胞EC109后,用TPA刺激,与其相应的空载体相比,转染细胞荧光素酶活力均极显著升高(t检验,P<0.01),约分别升高46.82和46.41倍;而TPA刺激组与没有TPA刺激组相比,pGLB-416和pGLE-416转染EC109细胞荧光素酶活力分别显著升高了5.17倍和7.37倍 (t检验,P<0.01).生物信息学分析显示,NGAL基因5′侧翼-416～+84区段至少存在4个潜在的TPA反应元件.结论食管癌细胞NGAL基因5′侧翼-416～+84区段存在着TPA反应元件.
