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结直肠癌中miR-31的表达及预测靶基因的生物信息学分析
目的 检测microRNA-31(miR-31)在结直肠癌中的表达及功能,预测其靶基因并进行生物信息学分析,为研究其作用和调控机制奠定基础.方法 采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测8种结肠癌细胞株、40例结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者癌组织及匹配的正常黏膜组织及33例结直肠腺瘤组织中miR-31的表达情况,并分析癌组织中miR-31表达与患者临床特征的关系.MTS法观察转染miR-31模拟物(mimics)组、抑制剂(inhibitor)组和对照组(miR-Control)及空白细胞组细胞生长的差异,Western blot检测空白细胞组、miR-31 mimics和inhibitor 三组细胞PCNA蛋白的表达.TargetScan、DIANA-microT、miRanda等软件预测miR-31的靶基因,并进行KEGG功能和信号通路富集分析.结果 miR-31在8种结肠癌细胞株中高表达,同时CRC患者癌组织中的表达高于腺瘤及正常黏膜组织(P＜0.05).其中癌组织和匹配的正常黏膜相比,miR-31表达明显上调(P=0.035),但腺瘤和正常黏膜相比,差异无统计学意义(t=0.122,P=0.904).miR-31的表达与临床病理特征间未见明显关系(P均＞0.05).转染miR-31 mimics后,miR-31的表达明显上调且和miR-Control组及空白细胞组相比,miR-31 mimics组细胞生长加快;而转染miR-31 inhibitor组miR-31表达显著降低,细胞生长活力明显受抑制.同时转染miR-31 inhibitor组PCNA蛋白表达较miR-31 mimics组和空白细胞组显著降低.生物信息学分析miR-31靶基因功能集中于转录后及翻译水平的调节、细胞连接、迁移及细胞运动等生物学过程.信号通路主要富集于内吞作用、轴突导向、T细胞受体信号通路、Wnt及MAPK信号通路.结论 miR-31在结直肠癌中高表达,且miR-31可以促进细胞生长和增殖,其靶基因可能通过调节多种生物学过程发挥作用.
