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重复经颅磁刺激对抑郁症患者外周血PDLIM5 mRNA转录水平的影响
目的:探讨重复经颅磁刺激(rTMS)对抑郁症患者的疗效及对患者外周血PDLIM5基因转录水平的影响.方法:正常健康者24例纳入正常组,抑郁症患者27例纳入抑郁组.抑郁组患者接受rTMS治疗2周.于治疗前、后,行汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分,并检测外周血中PDLIM5 mRNA转录水平.结果:抑郁组HAMD总分明显高于对照组(P＜0.05).rTMS治疗后,抑郁组“有效”13例(48.1％),“明显缓解”8例(29.6 ％);HAMD总分较治疗前明显下降(P＜0.01),但仍高于对照组(P＜0.05).治疗前抑郁组外周血PDLIM5 mRNA转录水平明显低于对照组(P＜0.05),治疗后抑郁者组外周血PDLIM5 mRNA表达水平与治疗前差异无统计学意义(P＞0.05).治疗前后,抑郁组HAMD总分与外周血PDLIM5 mRNA转录水平无明显相关性(P＞0.05).结论:rTMS治疗抑郁症有效,对外周血PDLIM5转录水平无影响.
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PDLIM5shRNA质粒构建及其稳定转染SH-SY5Y细胞株的建立
目的 构建PDLIM5 shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的SH-SY5Y(成神经细胞瘤细胞)细胞系.方法 合成PDLIM5基因干扰序列并插到RNAi真核表达载体pGFP-V-RS质粒中,通过酶切和测序进行鉴定.常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒PDLIM5 shRNA和对照质粒PDLIM5 Scramble经脂质体Lipofectamine 2000介导转染SH-SY5Y细胞,经puromycin持续筛选和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.RT-PCR及Western blot分别检测PDLIM5 mRNA及蛋白表达情况.结果 经双酶切及测序鉴定,重组获得的干扰真核表达质粒PDLIM5 shRNA与预期完全相同.PDLIM5 shRNA稳定转染SH-SY5Y细胞在荧光显微镜下呈亮绿色.RT-PCR及Western blot检测显示PDLIM5 mRNA及蛋白表达明显下调.结论 成功构建PDLIM5 shRNA真核表达载体及其稳定转染SH-SY5Y细胞系,为进一步研究PDLIM5在精神疾病中的功能奠定实验基础.
关键词： PDLIM5 PDLIM5 shRNA RNAi -
PDLLM5与α7烟碱乙酰胆碱受体的相互作用及作用位点的研究
目的 研究支架蛋白PDLIM5与神经元α7烟碱乙酰胆碱受体(α7nAChR)间的相互作用及其作用位点.方法 构建PDLIM5基因及其截短片段原核、真核重组表达载体和构建α7nAChR真核重组表达载体,并在大肠杆菌中表达与纯化相关蛋白.采用GST pull down及免疫共沉淀(CO-IP)方法检测PDLIM5与α7nAChR分子间相互作用及结合位点.结果 GST pull down和CO-IP方法检测结果显示PDLIM5与α7nAChR具有相互作用,且α7nAChR与PDLIM5中的PDZ结构域具有特异的相互作用,但不与PDLIM5中的LIM结构域发生反应.结论 PDLIM5通过其PDZ结构域介导同α7nAChR的相互作用.
