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犬声带瘢痕模型的建立及其细胞外基质中赖氨酰氧化酶、热休克蛋白70和透明质酸表达的研究
目的:建立犬声带瘢痕模型,分析损伤后不同时间段内声带愈合的形态学、组织病理学及细胞外基质(ECM)相关影响因子的变化.方法:5只实验犬随机分为对照组(1只)和实验组(4只),对照组不做特殊处理,实验组行支撑喉镜下CO2激光双侧声带烧灼术.各只实验犬分别在5个不同时间(术前和术后6h、3周、8周和12周)于支撑喉镜下观察声带损伤的大体形态学变化后处死,取材.采用苏木精-伊红染色、免疫荧光等方法观察声带各层组织病理学变化和超微形态学变化.观测声带组织内赖氨酰氧化酶(LOX)、热休克蛋白70(HSP70)和透明质酸(HA)的累积光密度值(IOD)的变化规律.结果:①喉内镜示,损伤后3周声带创面轻度充血水肿及炎性渗出;术后8周创面充血水肿消失,局部挛缩凹陷,无粘连和肉芽形成;术后12周双侧声带表面光滑,局部挛缩,声带瘢痕形成,声嘶明显.②苏木精-伊红染色示,术后6h声带创面大量炎性细胞浸润、红细胞渗出,细胞充血水肿;术后3周声带创面成纤维细胞增生,新生血管形成,大量纤维组织无序排列;术后8周声带创面各层纤维组织增生紊乱,血管增粗;术后12周时,声带创面固有层增厚,大量胶原纤维增多,排列紊乱,呈团状或束状,纤维间较多不规则间隙;血管和腺体少见或消失.③免疫荧光示LOX、HSP70、HA均定位于细胞质和细胞核,术后不同时间段表达的阳性程度不同,大多在炎性细胞、血管内皮细胞和腺体内表达较强烈.④IOD值比较,在不同时间段LOX的IOD值之间均有差异(P＜0.05);HSP70在术前与术后12周的IOD值无明显异常,余各组间差异有统计学意义(P＜0.01);HA在术后3周与12周间无异常,余各组间差异有统计学意义(P＜0.05).⑤LOX在术后6h表达减弱,术后3～12周呈上升趋势;HSP70在术后6h升至峰值,术后3～12周呈下降趋势;HA在术后6h表达减弱,术后8周升至峰值,术后8～12周下降.⑥透射电镜显示,声带术后3～8周固有层成纤维细胞极度活跃状态,细胞肿胀,细胞器丰富;术后12周时,声带固有层内仍功能活跃,纤维细胞呈网状排列紊乱,纤维间隙较大.结论:支撑喉镜下CQ激光声带烧灼术建立犬声带瘢痕模型可靠,损伤后3个月声带瘢痕基本形成.LOX、HSP70、HA在声带瘢痕形成的早中晚期发挥着不同的作用,可以作为检测声带瘢痕形成较敏感的指标.
