首页 > 文献资料
-
LE-pGJA-P/VAX黏膜递呈系统的制备及其理化性质评价
目的:制备LE- pGJA- P/VAX黏膜递呈系统,并对其理化和生物学性质进行检测.方法:利用中试生产的pGJA- P/VAX质粒通过与脂质体LE溶液直接混合制备LE- pGJA- P/VAX复合物,通过琼脂糖凝胶电泳阻滞实验和激光粒度仪检测该复合物的理化性质,并将其体外转染CHO细胞检测是否能体外表达目的蛋白.结果:制备的LE- pGJA- P/VAX复合物平均粒径为50 nm,ZETA电位为14.5 mV,体外转染CHO细胞48 h后,经细胞免疫荧光染色,转染组可见细胞浆红色荧光染色,提示可有效表达质粒编码的PAc蛋白,而裸质粒转染组则未见明显红色荧光.结论:LE- pGJA- P/VAX复合物表面电荷均匀,粒径小,且粒径分布范围窄,符合纳米粒子特征,可在体外表达编码蛋白,提示该递呈系统可用于防龋DNA疫苗的黏膜递呈,为后续增强防龋DNA疫苗经鼻腔黏膜途径投递的免疫效能奠定基础.
-
防龋DNA疫苗免疫效能评价中间接ELISA检测的建立和验证
目的:建立血清样本特异性抗体检测的间接ELISA方法,应用于龋齿DNA疫苗特异性抗体效力检测.方法:通过棋盘滴定确定样本检测条件建立血清特异性抗PAc抗体间接ELISA方法,并对所建立的方法进行特异性和精密度验证.结果:确定包被PAc蛋白浓度为10 mg/L,酶标抗体工作浓度1:5000,样本稀释倍数1:200.方法的重复性检测表明,板间和板内误差小于15%；中间精密度高、中、低3个浓度的CV值小于15%.结论:该方法特异性强,具有良好的重复性和中间精密度,可用于防龋DNA疫苗免疫效能评价中血清样本特异性抗PAc抗体的检测.
-
中试防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX免疫小鼠的实验研究
目的:评价中试防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX诱导小鼠体内特异性免疫应答的效果.方法:分别由武汉生物制品研究所中试制备和实验室采用德国Qiagen公司去内毒素质粒大量提取试剂盒手工提取防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX;两种方法制备的质粒分别于0周,2周经肌肉、鼻腔免疫小鼠,并以鞭毛蛋白作为黏膜佐剂与质粒同时经鼻腔免疫小鼠,PBS及空载体pVAX1作为对照.免疫前开始每两周收集小鼠血清和唾液样本,ELISA定量检测血清及唾液中特异性抗体含量.结果:中试质粒和手提质粒肌注时均能够诱导血清特异性IgG,但诱导唾液特异性sIgA的能力较为有限.在与黏膜佐剂鞭毛蛋白同时滴鼻时,中试质粒可诱导较为明显的血清特异性IgG和唾液特异性sIgA.在相同的免疫条件下,中试质粒诱导的特异性抗体水平低于手提质粒组,但二者无显著性差异.结论:中试防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX能够诱导小鼠体内特异性体液免疫应答.
