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生鲜葱白自身酶解条件的研究
目的:通过对生鲜葱白自身酶解条件进行初步研究,为进一步研究葱白中的酶活性提供依据.方法:利用丙酮酸与2,4-二硝基苯肼-氢氧化钠系统发生显色反应原理,采用分光光度法测定丙酮酸的生成量来推算酶活力,同时根据丙酮酸的生成量间接反映含硫化合物的生成量,考察不同温度、pH、金属离子、时间以及不同灭活方式对酶解的影响.结果:温度在25～55℃之间酶活性较高,超过65℃后急剧下降;pH在6～8之间时,酶活性受到的影响比较小;Fe3+、Cu2+这两种金属离子对鲜葱白中酶活性有一定抑制作用,而Ca2+、Zn2+对葱白中酶的活性影响不是很大;酶促反应进行迅速,30 min内完成;对比三种灭活方式的影响是微波＞有机溶剂＞高温.结论:葱白中酶有着其适宜的反应温度、pH以及离子活性中心.
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生鲜葱白中粗酶的提取研究
目的:研究从生鲜葱白中提取粗酶的方法,为下一步分离纯化和临床应用提供依据.方法:采用葱白中提取的混合底物,用丙酮酸法测定葱白中酶的活力,采用磷酸盐缓冲液提取粗酶,以小牛血清白蛋白为标准,用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质的浓度.结果:pH 6.5的Na-K磷酸盐缓冲液+10％甘油+0.2％EDTA,预冷12h,临用前加5’-磷酸吡哆醛为浸提液所提取粗酶的相对比活度较高,故定该组分为葱白中粗酶提取的浸提液；PEG用量为15％时上清中酶活急剧减小,随后趋于平缓趋势,该浓度下的上清液中的酶的比活度相对小,故选择该浓度为沉淀蛋白时PEG8000的浓度；随着透析时间的延长,蛋白质溶液中蛋白质含量及酶活性均在下降,透析6h和24 h的蛋白质溶液中酶活性和蛋白质含量均相差不大,可以说明当透析6h后,透析基本已经达到平衡.结论:该方法操作简便可以用于生鲜葱白中粗酶的提取.
