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纤维蛋白原相关结构域文献资料
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人fg12凝血酶原酶FRED结构域的原核表达、纯化及其凝血活性的鉴定
目的 建立人fg12凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域(fibrinogen-related domain,FRED)的原核表达系统,并鉴定表达蛋白的凝血活性.方法 应用RT-PCR从外周血单个核细胞扩增fg12凝血酶原酶FRED基因,克隆到原核表达载体pET22b(+),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达,重组蛋白经SDS-PAGE电泳和免疫印迹鉴定并用His-Tag柱纯化,以促凝活性(procoagulant activity,PCA)检测鉴定其凝血功能.结果 扩增了人fg12凝血酶原酶FRED基因,成功构建了重组pET-FRED原核表达质粒,表达的融合蛋白具有直接促凝血活性.结论 建立了人fg12凝血酶原酶FRED的高效原核表达系统,FRED可能为fg12凝血酶原酶促凝血的活性区域.
关键词： 凝血酶原酶 fg12 纤维蛋白原相关结构域 原核表达 促凝活性
